Qual é o ponto isoelétrico?

As proteínas

são construídas com cadeias de aminoácidos, cada uma com valores diferentes de pH. O pH geral da proteína é composto da mistura dos valores de pH dos aminoácidos individuais, à medida que formam íons na solução específica na qual são dissolvidos. O ponto isoelétrico (PI) de uma proteína é o pH no qual essa proteína não tem carga líquida. Essa propriedade pode ser explorada para separar a proteína com o PI conhecido de outras proteínas em uma mistura heterogênea. A outra extremidade do aminoácido é o terminal carboxil que é ácido, com um pH baixo. Em diferentes valores de pH, os aminoácidos nas proteínas variam em suas acusações. As proteínas abaixo do ponto isoelétrico têm uma carga positiva. Por outro lado, aqueles acima deste ponto têm uma carga negativa.

Para explorar o conhecimento do ponto isoelétrico para PPurificação da Roteína, uma mistura de proteínas é submetida a um campo elétrico. Isso geralmente é feito em géis de agarose ou poliacrilamida e é conhecido como foco isoelétrico. Uma técnica mais antiga é executar o procedimento em uma escala maior em uma coluna de vidro usando uma solução de sacarose com eletrodos em cada extremidade. São adicionados compostos chamados anfólitos que causam a formação de um gradiente de pH consistente. Quando o gel ou coluna é submetido à corrente elétrica, as proteínas migram até atingirem seu ponto isoelétrico e depois permanecem estacionárias.

As proteínas

nos géis geralmente são visíveis por um corante que liga as proteínas. Às vezes, se as enzimas estiverem sendo estudadas, um substrato pode ser usado que dê uma reação colorida. Normalmente, são usados ​​padrões que têm proteínas de pontos isoelétricos conhecidos.

Uma vez que se sabe onde a proteína desejada está localizada, uma técnica comum é cortar a proteína isolada do gel. A proteína pode então ser purificada e sequenciada. Uma vez a sequênciaCE é conhecido, pode ser usado para projetar iniciadores para a reação em cadeia da polimerase (PCR) e usada para clonar o gene da proteína se estiver disponível material de ácido nucleico adequado.

O foco isoelétrico também é uma maneira comum de analisar proteínas intimamente relacionadas para ver como elas são diferentes uma da outra. Uma complicação pode ser que as proteínas podem ter açúcares ligados a elas. Isso é chamado de glicosilação e pode afetar o PI da proteína. Pode parecer que existem várias proteínas com diferentes pontos isoelétricos, quando na verdade há apenas uma proteína que tem sido diferencialmente glicosilada. As proteínas purificadas por métodos padrão, como a cromatografia, às vezes são analisados ​​pelo foco isoelétrico para garantir sua pureza.