Wat is een biotine -antilichaam?
In tegenstelling tot wat men zou kunnen denken, is een biotine -antilichaam geen stof die wordt opgevoed tegen biotine. In plaats daarvan is een biotine -antilichaam een antilichaam dat is geconjugeerd aan biotine. Biotine bindt sterk aan een ligand-avidine-die op zijn beurt kan worden geconjugeerd aan licht-detecteerbare moleculen zoals fluoroforen. Biotine en avidine vormen een van de sterkste biologisch relevante covalente bindingen die bekend zijn, waardoor biotine- en avidine-geconjugeerde ligand/receptor-eenheden vooral nuttig zijn in wetenschappelijke studies.
Biotine is een b-complex vitamine-vitamine B7. Het is zo'n klein molecuul dat meerdere biotinemoleculen kunnen worden geconjugeerd aan een enkel monoklonaal of polyklonaal antilichaam. Het feit dat biotine ook in water oplosbaar is, zorgt voor een grotere veelzijdigheid in buffersystemen dan wanneer het onoplosbaar was. Voor een grotere specificiteit wordt monoklonale antilichaamconjugatie tegen biotine vaak aanbevolen over polyklonale antilichaamconjugatie. Het biotinemolecuul kan direct Bo zijnmet het antilichaam van interesse, of het kan worden gekoppeld door een moleculaire staart om meer bewegingsvrijheid mogelijk te maken.
De biotine ligand avidine wordt gevonden in ei -albumine. Het kan goedkoop worden gemaakt en gemakkelijk geïsoleerd worden. Meerdere avidinemoleculen binden aan elke biotinereceptor, waardoor een enkel antilichaamdetectiesignaal wordt versterken. Wanneer een biotine -antilichaam zich hecht aan een interessante antigeen, kan een experimentator vervolgens het complex blootstellen aan avidine geconjugeerd aan fluoroforen, waardoor het complex detecteerbaar wordt. Door middel van fluorescerende beeldvorming kunnen het biotine-antilichaam en avidine-geconjugeerde ligand worden gedetecteerd met lichtmicroscopie en kunnen interessante antigenen worden bestudeerd in situ .
Hoewel het creëren en gebruik van een biotine -antilichaam en een fluorescent getagd avidinemolecuul een veel voorkomende oplossing is voor antigeendetectie, bestaan er alternatieven die nog steeds gebruik maken van het biotine/avidinecomplex. Bindende biotine aan eenLigand als een neurotoxine kan voordelig zijn bij het detecteren van plaatsing van neuronale receptoren die door het betreffende neurotoxine zijn beïnvloed. Het is ook mogelijk om biotine te conjugeren met een nucleotidesequentie zoals messenger -ribonucleïnezuur (mRNA) om te vinden waar deze nucleotidesequenties worden vertaald in eiwitten of om cellulaire mRNA -regulatie te detecteren.
Het is mogelijk om gebiotinyleerde polyklonale of monoklonale antilichamen te kopen, hoewel de productie van gebiotinyleerde antilichaam binnen het vermogen van veel experimentatoren valt. Protocollen kunnen online worden gevonden, wat suggereert dat antilichaambiotinylatiemethoden, hoewel de meest gemakkelijk gevolgde protocollen biotine direct verbinden met een antilichaam in plaats van te suggereren hoe een moleculaire spacer te intercaleren. Moleculaire spacers tussen biotine en het bijbehorende antilichaam zorgen voor grotere afstand om meer moleculen bloot te stellen aan bindingsplaatsen, en deze biotine -antilichamen worden meestal gekocht in plaats van gemaakt.