Wat is een biotine-antilichaam?
In tegenstelling tot wat men eerst zou denken, is een biotine-antilichaam geen stof die tegen biotine wordt opgewekt. In plaats daarvan is een biotine-antilichaam een antilichaam dat is geconjugeerd met biotine. Biotine bindt sterk aan een ligand - avidine - dat op zijn beurt kan worden geconjugeerd met licht-detecteerbare moleculen zoals fluoroforen. Biotine en avidine vormen een van de sterkste biologisch relevante covalente bindingen die bekend zijn, waardoor biotine- en avidine-geconjugeerde ligand / receptor-eenheden bijzonder nuttig zijn in wetenschappelijke studies.
Biotine is een vitamine B-complex - vitamine B7. Het is zo'n klein molecuul dat meerdere biotinemoleculen kunnen worden geconjugeerd met een enkel monoklonaal of polyklonaal antilichaam. Het feit dat biotine ook in water oplosbaar is, zorgt voor een grotere veelzijdigheid in buffersystemen dan wanneer het onoplosbaar zou zijn. Voor een grotere specificiteit wordt monoklonale antilichaamconjugatie aan biotine vaak aanbevolen boven polyklonale antilichaamconjugatie. Het biotinemolecuul kan direct worden gebonden met het antilichaam van interesse, of het kan worden gekoppeld via een moleculaire staart om meer bewegingsvrijheid mogelijk te maken.
Het biotine-ligand avidine wordt gevonden in ei-albumine. Het kan goedkoop worden gemaakt en gemakkelijk worden geïsoleerd. Meerdere avidine-moleculen binden aan elke biotinereceptor, waardoor een enkel antilichaamdetectiesignaal wordt versterkt. Wanneer een biotine-antilichaam hecht aan een interessant antigeen, kan een experimentator het complex vervolgens blootstellen aan avidine geconjugeerd aan fluoroforen, waardoor het complex detecteerbaar wordt. Door middel van fluorescerende beeldvorming kunnen het biotine-antilichaam en het met avidine geconjugeerde ligand worden gedetecteerd met lichtmicroscopie en kunnen interessante antigenen in situ worden bestudeerd.
Hoewel het creëren en gebruiken van een biotine-antilichaam en een fluorescent gemerkt avidine-molecuul een veel voorkomende oplossing is voor antigeendetectie, bestaan er alternatieven die nog steeds gebruik maken van het biotine / avidine-complex. Het binden van biotine aan een ligand zoals een neurotoxine kan voordelig zijn bij het detecteren van de plaatsing van neuronale receptoren die worden beïnvloed door het neurotoxine in kwestie. Het is ook mogelijk om biotine te conjugeren aan een nucleotidesequentie zoals messenger ribonucleïnezuur (mRNA) om te vinden waar deze nucleotidesequenties worden vertaald in eiwitten of om cellulaire mRNA-regulatie te detecteren.
Het is mogelijk om gebiotinyleerde polyklonale of monoklonale antilichamen te kopen, hoewel de productie van gebiotinyleerde antilichamen binnen het vermogen van veel experimentatoren ligt. Protocollen kunnen online worden gevonden die wijzen op biotinylatiemethoden van antilichamen, hoewel de meest eenvoudig te volgen protocollen biotine direct aan een antilichaam koppelen in plaats van suggereren hoe een moleculaire spacer moet worden geïntercaleerd. Moleculaire spacers tussen biotine en het bijbehorende antilichaam maken grotere afstand mogelijk om meer moleculen bloot te stellen aan bindingsplaatsen, en deze biotine-antilichamen worden meestal gekocht in plaats van gemaakt.