Che cos'è un anticorpo da biotina?
Contrariamente a quanto si potrebbe pensare, un anticorpo da biotina non è una sostanza che viene sollevata contro la biotina. Piuttosto, un anticorpo della biotina è un anticorpo che è stato coniugato con la biotina. La biotina si lega fortemente a un ligando - avidina - che a sua volta può essere coniugato con molecole rilevabili alla luce come i fluorofori. La biotina e l'avidina formano uno dei più forti legami covalenti biologicamente rilevanti conosciuti, rendendo le unità di ligando / recettore coniugate con biotina e avidina particolarmente utili negli studi scientifici.
La biotina è una vitamina del complesso B - vitamina B7. È una molecola così piccola che è possibile coniugare più molecole di biotina in un singolo anticorpo monoclonale o policlonale. Il fatto che la biotina sia anche idrosolubile consente una maggiore versatilità nei sistemi tampone rispetto a se fosse insolubile. Per una maggiore specificità, la coniugazione di anticorpi monoclonali alla biotina è spesso raccomandata rispetto alla coniugazione di anticorpi policlonali. La molecola della biotina può essere direttamente legata all'anticorpo di interesse oppure può essere collegata attraverso una coda molecolare per consentire una maggiore libertà di movimento.
Il ligando avidin della biotina si trova nell'albumina d'uovo. Può essere economico e facilmente isolato. Più molecole di avidina si legheranno a ciascun recettore della biotina, amplificando un singolo segnale di rilevazione di anticorpi. Quando un anticorpo della biotina aderisce a un antigene di interesse, uno sperimentatore può quindi esporre il complesso ad avidina coniugata a fluorofori, rendendo il complesso rilevabile. Attraverso l'imaging fluorescente, l'anticorpo della biotina e il ligando coniugato con avidina possono essere rilevati con la microscopia ottica e gli antigeni di interesse possono essere studiati in situ .
Sebbene la creazione e l'uso di un anticorpo di biotina e una molecola di avidina marcata in modo fluorescente sia una soluzione comune per il rilevamento dell'antigene, esistono alternative che fanno ancora uso del complesso biotina / avidina. Legare la biotina a un ligando come una neurotossina può essere vantaggioso nel rilevare il posizionamento dei recettori neuronali colpiti dalla neurotossina in questione. È anche possibile coniugare la biotina in una sequenza nucleotidica come l'acido ribonucleico messaggero (mRNA) per trovare dove queste sequenze nucleotidiche vengono tradotte in proteine o per rilevare la regolazione cellulare dell'mRNA.
È possibile acquistare anticorpi policlonali o monoclonali biotinilati, sebbene la produzione di anticorpi biotinilati rientri nelle capacità di molti sperimentatori. I protocolli possono essere trovati online suggerendo metodi di biotinilazione degli anticorpi, sebbene i protocolli più facilmente seguiti colleghino direttamente la biotina a un anticorpo piuttosto che suggerire come intercalare un distanziatore molecolare. I distanziatori molecolari tra la biotina e il suo anticorpo associato consentono una maggiore spaziatura per esporre più molecole ai siti di legame e questi anticorpi della biotina vengono solitamente acquistati anziché prodotti.