Cos'è un anticorpo biotina?
Contrariamente a ciò che si potrebbe prima pensare, un anticorpo di biotina non è una sostanza che viene sollevata contro la biotina. Piuttosto, un anticorpo di biotina è un anticorpo che è stato coniugato a biotina. La biotina si lega fortemente a un ligando-avidina-che a sua volta può essere coniugata a molecole rilevabili dalla luce come i fluorofori. La biotina e l'avidina formano uno dei legami covalenti più forti biologicamente rilevanti noti, rendendo particolarmente utili gli unità di ligando/recettore coniugate con biotina e avidina.
La biotina è una vitamina B-complessa-vitamina B7. È una molecola così piccola che più molecole di biotina possono essere coniugate con un singolo anticorpo monoclonale o policlonale. Il fatto che la biotina sia anche solubile in acqua consente una maggiore versatilità nei sistemi di tampone rispetto a se fosse insolubile. Per una maggiore specificità, la coniugazione di anticorpi monoclonali alla biotina è spesso raccomandata rispetto alla coniugazione dell'anticorpo policlonale. La molecola di biotina può essere direttamente BOcon l'anticorpo di interesse, oppure può essere collegato attraverso una coda molecolare per consentire una maggiore libertà di movimento.
Il ligando biotina si trova nell'albumina delle uova. Può essere fatto a buon mercato e facilmente isolato. Molecole di avidina multiple si legaranno a ciascun recettore della biotina, amplificando un singolo segnale di rilevamento di anticorpi. Quando un anticorpo biotina aderisce a un antigene di interesse, uno sperimentatore può quindi esporre il complesso ad avidina coniugato ai fluorofori, rendendo rilevabile il complesso. Attraverso l'imaging fluorescente, l'anticorpo biotina e il ligando coniugato con avidina possono essere rilevati con microscopia ottica e gli antigeni di interesse possono essere studiati in situ .
Sebbene la creazione e l'uso di un anticorpo biotina e una molecola di avidina taggata fluorescente sia una soluzione comune per il rilevamento dell'antigene, esistono alternative che fanno ancora uso del complesso biotina/avidina. Biotina legante a aIl ligando come una neurotossina può essere vantaggioso nel rilevare il posizionamento dei recettori neuronali colpiti dalla neurotossina in questione. È anche possibile coniugare la biotina con una sequenza nucleotidica come l'acido ribonucleico di messaggero (mRNA) per scoprire dove queste sequenze nucleotidiche vengono tradotte in proteine o per rilevare la regolazione dell'mRNA cellulare.
È possibile acquistare anticorpi policlonali o monoclonali biotinilati, sebbene la produzione di anticorpi biotinilati rientri nella capacità di molti sperimentatori. I protocolli possono essere trovati online suggerendo metodi di biotinilazione degli anticorpi, sebbene più facilmente seguino i protocolli collegano direttamente la biotina a un anticorpo anziché suggerire come intercalare un distanziatore molecolare. I distanziali molecolari tra biotina e il suo anticorpo associato consentono una maggiore spaziatura per esporre più molecole ai siti di legame e questi anticorpi biotina vengono solitamente acquistati anziché realizzati.