O que é um anticorpo de biotina?
Ao contrário do que se poderia pensar primeiro, um anticorpo de biotina não é uma substância levantada contra a biotina. Em vez disso, um anticorpo de biotina é um anticorpo que foi conjugado a biotina. A biotina se liga fortemente a um ligante-avidina-que pode, por sua vez, ser conjugado a moléculas detectáveis leves, como fluoróforos. A biotina e a avidina formam uma das ligações covalentes biologicamente relevantes mais fortes conhecidas, tornando as unidades ligantes/receptoras conjugadas com biotina e avidina especialmente úteis em estudos científicos.
A biotina é uma vitamina do complexo B-vitamina B7. É uma molécula tão pequena que múltiplas moléculas de biotina podem ser conjugadas com um único anticorpo monoclonal ou policlonal. O fato de a biotina também ser solúvel em água permite maior versatilidade em sistemas tampão do que se fosse insolúvel. Para maior especificidade, a conjugação de anticorpos monoclonais à biotina é frequentemente recomendada sobre a conjugação de anticorpos policlonais. A molécula de biotina pode ser diretamente boNDED com o anticorpo de interesse, ou pode ser ligado através de uma cauda molecular para permitir mais liberdade de movimento. Pode ser feito barato e facilmente isolado. Múltiplas moléculas de avidina se ligarão a cada receptor de biotina, amplificando um único sinal de detecção de anticorpos. Quando um anticorpo de biotina adere a um antígeno de interesse, um experimentador pode expor o complexo a avidina conjugada com fluoróforos, tornando o complexo detectável. Através da imagem fluorescente, o anticorpo de biotina e o ligante conjugado com avidina podem ser detectados com microscopia leve, e os antígenos de interesse podem ser estudados in situ .
Embora a criação e o uso de um anticorpo de biotina e uma molécula de avidina marcada com fluorescência seja uma solução comum para a detecção de antígeno, existem alternativas que ainda usam o complexo de biotina/avidina. Vinculando biotina a umO ligante como uma neurotoxina pode ser vantajoso na detecção de posicionamento dos receptores neuronais afetados pela neurotoxina em questão. Também é possível conjugar a biotina a uma sequência de nucleotídeos, como o ácido ribonucleico mensageiro (mRNA), para descobrir onde essas seqüências de nucleotídeos estão sendo traduzidas em proteínas ou para detectar regulação do mRNA celular.
É possível comprar anticorpos policlonais ou monoclonais biotinilados, embora a produção de anticorpos biotinilados esteja dentro da capacidade de muitos experimentadores. Os protocolos podem ser encontrados on -line, sugerindo métodos de biotinilação de anticorpos, embora os protocolos mais facilmente seguidos vinculem diretamente a biotina a um anticorpo, em vez de sugerir como intercalar um espaçador molecular. Os espaçadores moleculares entre biotina e seu anticorpo associado permitem que o maior espaçamento exponha mais moléculas a locais de ligação, e esses anticorpos de biotina geralmente são comprados em vez de fabricado.