O que é um anticorpo biotina
Ao contrário do que se poderia pensar primeiro, um anticorpo biotina não é uma substância criada contra a biotina. Em vez disso, um anticorpo biotina é um anticorpo que foi conjugado à biotina. A biotina se liga fortemente a um ligante - avidina - que pode, por sua vez, ser conjugado com moléculas detectáveis pela luz, como os fluoróforos. A biotina e a avidina formam uma das ligações covalentes biologicamente mais fortes conhecidas, tornando as unidades ligantes / receptores conjugados à biotina e à avidina especialmente úteis em estudos científicos.
A biotina é uma vitamina do complexo B - vitamina B7. É uma molécula tão pequena que várias moléculas de biotina podem ser conjugadas com um único anticorpo monoclonal ou policlonal. O fato de a biotina também ser solúvel em água permite maior versatilidade em sistemas tampão do que se fosse insolúvel. Para maior especificidade, a conjugação de anticorpo monoclonal à biotina é frequentemente recomendada em relação à conjugação de anticorpo policlonal. A molécula de biotina pode ser diretamente ligada ao anticorpo de interesse, ou pode ser ligada através de uma cauda molecular para permitir mais liberdade de movimento.
O ligante de biotina avidina é encontrado na albumina do ovo. Pode ser fabricado de forma barata e facilmente isolado. Várias moléculas de avidina se ligam a cada receptor de biotina, amplificando um único sinal de detecção de anticorpos. Quando um anticorpo biotina adere a um antígeno de interesse, um experimentador pode então expor o complexo à avidina conjugada aos fluoróforos, tornando o complexo detectável. Através de imagens fluorescentes, o anticorpo biotina e o ligante conjugado com avidina podem ser detectados com microscopia óptica, e antígenos de interesse podem ser estudados in situ .
Embora a criação e o uso de um anticorpo biotina e uma molécula de avidina com marcação fluorescente seja uma solução comum para a detecção de antígenos, existem alternativas que ainda fazem uso do complexo biotina / avidina. A ligação da biotina a um ligante como uma neurotoxina pode ser vantajosa na detecção da colocação de receptores neuronais afetados pela neurotoxina em questão. Também é possível conjugar biotina a uma sequência nucleotídica como o ácido ribonucleico mensageiro (mRNA) para descobrir onde essas seqüências nucleotídicas estão sendo traduzidas em proteínas ou para detectar a regulação do mRNA celular.
É possível comprar anticorpos policlonais ou monoclonais biotinilados, embora a produção de anticorpos biotinilados esteja dentro da capacidade de muitos experimentadores. Os protocolos podem ser encontrados online, sugerindo métodos de biotinilação de anticorpos, embora os protocolos mais facilmente seguidos vinculem diretamente a biotina a um anticorpo, em vez de sugerir como intercalar um espaçador molecular. Os espaçadores moleculares entre biotina e seu anticorpo associado permitem maior espaçamento para expor mais moléculas aos locais de ligação, e esses anticorpos de biotina geralmente são comprados em vez de fabricados.