Qu'est-ce qu'un anticorps de biotine?
Contrairement à ce que l'on pourrait penser en premier lieu, un anticorps anti-biotine n'est pas une substance produite contre la biotine. Un anticorps de biotine est plutôt un anticorps qui a été conjugué à la biotine. La biotine se lie fortement à un ligand, l'avidine, qui peut à son tour être conjuguée à des molécules détectables par la lumière, telles que les fluorophores. La biotine et l'avidine forment l'une des liaisons covalentes biologiquement pertinentes les plus fortes connues, ce qui rend les unités ligand / récepteur conjuguées à la biotine et à l'avidine particulièrement utiles dans les études scientifiques.
La biotine est une vitamine complexe B - vitamine B7. La taille de la molécule est telle que plusieurs molécules de biotine peuvent être conjuguées à un seul anticorps monoclonal ou polyclonal. Le fait que la biotine soit également soluble dans l'eau permet une plus grande polyvalence dans les systèmes tampons que si elle était insoluble. Pour plus de spécificité, la conjugaison d'anticorps monoclonaux à la biotine est souvent recommandée par rapport à la conjugaison d'anticorps polyclonaux. La molécule de biotine peut être directement liée à l'anticorps d'intérêt ou par l'intermédiaire d'une queue moléculaire pour permettre une plus grande liberté de mouvement.
L'avidine, un ligand de biotine, se trouve dans l'albumine d'œuf. Il peut être fabriqué à moindre coût et facilement isolé. Plusieurs molécules d'avidine se lieront à chaque récepteur de biotine, amplifiant un signal de détection d'anticorps unique. Lorsqu'un anticorps de biotine adhère à un antigène d'intérêt, un expérimentateur peut ensuite exposer le complexe à de l'avidine conjuguée à des fluorophores, ce qui rend le complexe détectable. Par imagerie fluorescente, l'anticorps à la biotine et le ligand conjugué à l'avidine peuvent être détectés au microscope optique et les antigènes d'intérêt peuvent être étudiés in situ .
Bien que la création et l'utilisation d'un anticorps de biotine et d'une molécule d'avidine marquée par fluorescence soient une solution courante pour la détection d'antigènes, il existe des alternatives qui utilisent encore le complexe biotine / avidine. La liaison de la biotine à un ligand, tel qu'une neurotoxine, peut être avantageuse pour détecter la mise en place de récepteurs neuronaux affectés par la neurotoxine en question. Il est également possible de conjuguer la biotine à une séquence nucléotidique telle que l'acide ribonucléique messager (ARNm) pour rechercher où ces séquences nucléotidiques sont en train d'être traduites en protéines ou pour détecter la régulation de l'ARNm cellulaire.
Il est possible d'acheter des anticorps polyclonaux ou monoclonaux biotinylés, bien que la production d'anticorps biotinylés soit à la portée de nombreux expérimentateurs. Des protocoles peuvent être trouvés en ligne suggérant des méthodes de biotinylation d'anticorps, bien que la plupart des protocoles facilement suivis lient directement la biotine à un anticorps plutôt que de suggérer comment intercaler un espaceur moléculaire. Les espaceurs moléculaires entre la biotine et son anticorps associé permettent un plus grand espacement pour exposer plus de molécules à des sites de liaison, et ces anticorps contre la biotine sont généralement achetés plutôt que fabriqués.