Vad är en biotinantikropp?
I motsats till vad man först kan tänka, är en biotinantikropp inte ett ämne som tas upp mot biotin. Snarare är en biotinantikropp en antikropp som har konjugerats till biotin. Biotin binder starkt till en ligand - avidin - som i sin tur kan konjugeras till ljusdetekterbara molekyler som fluoroforer. Biotin och avidin utgör en av de starkaste biologiskt relevanta kovalenta bindningarna som är kända, vilket gör biotin- och avidinkonjugerad ligand / receptorenhet särskilt användbar i vetenskapliga studier.
Biotin är ett B-komplex vitamin - vitamin B7. Det är en så liten molekyl att flera biotinmolekyler kan konjugeras till en enda monoklonal eller polyklonal antikropp. Det faktum att biotin också är vattenlösligt möjliggör större mångsidighet i buffertsystem än om det var olösligt. För större specificitet rekommenderas ofta monoklonal antikroppskonjugering till biotin jämfört med polyklonal antikroppskonjugering. Biotinmolekylen kan vara direkt bunden med antikroppen av intresse, eller den kan kopplas genom en molekylär svans för att möjliggöra mer rörelsefrihet.
Biotinligandavidinet finns i äggalbumin. Det kan tillverkas billigt och enkelt isoleras. Flera avidinmolekyler binder till varje biotinreceptor och förstärker en enda antikroppsdetekteringssignal. När en biotinantikropp vidhäftar till ett antigen av intresse kan en experimenterande exponera komplexet för avidin konjugerat till fluoroforer, vilket gör komplexet detekterbart. Genom fluorescerande avbildning kan biotinantikroppen och avidin-konjugerad ligand detekteras med ljusmikroskopi, och antigen av intresse kan studeras in situ .
Även om skapandet och användningen av en biotinantikropp och en fluorescerande märkt avidinmolekyl är en vanlig lösning för antigendetektion, finns det alternativ som fortfarande använder biotin / avidinkomplexet. Bindning av biotin till en ligand som ett neurotoxin kan vara fördelaktigt för att detektera placering av neuronala receptorer som påverkas av neurotoxinet i fråga. Det är också möjligt att konjugera biotin till en nukleotidsekvens såsom messenger ribonukleinsyra (mRNA) för att hitta var dessa nukleotidsekvenser översätts till proteiner eller för att detektera cellulär mRNA-reglering.
Det är möjligt att köpa biotinylerade polyklonala eller monoklonala antikroppar, även om biotinylerad antikroppsproduktion ligger inom många experimenters förmåga. Protokoll kan hittas på nätet som antyder antikroppsbiotinyleringsmetoder, även om protokoll som lättast följs direkt kopplar biotin till en antikropp snarare än att föreslå hur man interkalerar en molekylär distans. Molekylära distansorgan mellan biotin och dess tillhörande antikropp möjliggör större avstånd för att utsätta fler molekyler för bindningsställen, och dessa biotinantikroppar köps vanligtvis snarare än tillverkade.