Co to jest przeciwciało biotyny?

Wbrew temu, co można by pomyśleć, przeciwciało biotyny nie jest substancją, która jest podniesiona przeciwko biotynie. Przeciwciało biotyny jest raczej przeciwciałem, które zostało skoniugowane z biotyną. Biotyna silnie wiąże się z ligandem-quidiną-która z kolei może być skoniugowana z cząsteczkami wykrywalnymi światłem, takimi jak fluorofory. Biotyna i awidyna stanowią jedno z najsilniejszych biologicznie istotnych kowalencyjnych wiązań, co sprawia, że ​​jednostki ligand/receptor skoniugowane z biotyną i awidyną są szczególnie przydatne w badaniach naukowych.

Biotyna to witamina B-kompleks-witamina B7. Jest to taka mała cząsteczka, że ​​wiele cząsteczek biotyny można sprzężone z pojedynczym przeciwciałem monoklonalnym lub poliklonalnym. Fakt, że biotyna jest również rozpuszczalna w wodzie, pozwala na większą wszechstronność w systemach buforowych niż gdyby była nierozpuszczalna. W przypadku większej swoistości koniugacja przeciwciała monoklonalnego z biotyną jest często zalecana przez koniugację przeciwciała poliklonalnego. Cząsteczka biotyny może być bezpośrednio BONd z interesującym przeciwciałem lub można je połączyć przez ogon molekularny, aby umożliwić wolność ruchu.

Avidin ligand biotyny znajduje się w albuminie jaja. Można go tanio wykonać i łatwo odizolować. Wiele cząsteczek awidyny wiąże się z każdym receptorem biotyny, wzmacniając jednocześnie sygnał wykrywania pojedynczego przeciwciał. Gdy przeciwciało biotyny przylega do interesującego antygenu, eksperymentator może następnie wystawiać kompleks na VIDIN skoniugowane z fluoroforami, co czyni kompleks wykrywalnym. Poprzez obrazowanie fluorescencyjne przeciwciało biotyny i ligand skoniugowany awidyna można wykryć za pomocą mikroskopii świetlnej i można zbadać interesujące antygeny in situ .

Chociaż tworzenie i stosowanie przeciwciała biotyny i fluorescencyjnie oznaczonej cząsteczki awidyny jest powszechnym rozwiązaniem do wykrywania antygenu, istnieją alternatywy, które nadal korzystają z kompleksu biotyny/awidyny. Wiązanie biotyny zLigand jak neurotoksyna może być korzystna w wykrywaniu umieszczenia receptorów neuronalnych dotkniętych danej neurotoksyny. Możliwe jest również sprzężenie biotyny z sekwencją nukleotydową, taką jak przekaźnik kwas rybonukleinowy (mRNA) w celu znalezienia tam, gdzie te sekwencje nukleotydowe są tłumaczone na białka lub wykryć regulację mRNA komórkową.

Możliwe jest zakup biotynylowanych przeciwciał poliklonalnych lub monoklonalnych, chociaż produkcja przeciwciał biotynylowanych jest w zdolności wielu eksperymentatorów. Protokoły można znaleźć online sugerujące metody biotynylacji przeciwciał, choć najłatwiej przestrzegać protokołów bezpośrednio łączą biotynę z przeciwciałem, zamiast sugerować, jak interkalować przekładkę molekularną. Molekularne przekładki między biotyną a związanym z nią przeciwciałem pozwalają na większe odstępy, aby narażać więcej cząsteczek na miejsca wiązania, a te przeciwciała biotyny są zwykle kupowane, a nie wykonane.