Co to jest przeciwciało biotyny?
W przeciwieństwie do tego, co mogłoby się początkowo wydawać, przeciwciało biotynowe nie jest substancją wzbudzaną przeciwko biotynie. Przeciwnie, przeciwciało biotynowe jest przeciwciałem skoniugowanym z biotyną. Biotyna silnie wiąże się z ligandem - awidyną - który z kolei może być sprzężony z cząsteczkami wykrywalnymi światłem, takimi jak fluorofory. Biotyna i awidyna tworzą jedno z najsilniejszych znanych biologicznie istotnych wiązań kowalencyjnych, dzięki czemu jednostki ligand / receptor skoniugowane z biotyną i awidyną są szczególnie przydatne w badaniach naukowych.
Biotyna jest witaminą B-complex - witaminą B7. Jest to tak mała cząsteczka, że wiele cząsteczek biotyny można skoniugować z pojedynczym przeciwciałem monoklonalnym lub poliklonalnym. Fakt, że biotyna jest również rozpuszczalna w wodzie, pozwala na większą wszechstronność w układach buforowych niż w przypadku nierozpuszczalności. Aby uzyskać większą swoistość, koniugacja przeciwciała monoklonalnego z biotyną jest często zalecana w porównaniu z koniugacją przeciwciała poliklonalnego. Cząsteczka biotyny może być bezpośrednio związana z przeciwciałem będącym przedmiotem zainteresowania lub może być połączona przez ogon molekularny, aby umożliwić większą swobodę ruchów.
Awidyna ligandu biotyny znajduje się w albuminie jaja. Może być tanio wykonany i łatwo izolowany. Wiele cząsteczek awidyny wiąże się z każdym receptorem biotyny, wzmacniając pojedynczy sygnał wykrywania przeciwciała. Gdy przeciwciało biotyny przylega do antygenu będącego przedmiotem zainteresowania, eksperymentator może następnie wystawić kompleks na awidynę skoniugowaną z fluoroforami, dzięki czemu kompleks jest wykrywalny. Poprzez obrazowanie fluorescencyjne przeciwciało biotyny i ligand skoniugowany z awidyną można wykryć za pomocą mikroskopii świetlnej, a antygeny będące przedmiotem zainteresowania można badać in situ .
Chociaż tworzenie i stosowanie przeciwciała biotyny i fluorescencyjnie znakowanej cząsteczki awidyny jest powszechnym rozwiązaniem do wykrywania antygenów, istnieją alternatywy, które nadal wykorzystują kompleks biotyna / awidyna. Wiązanie biotyny z ligandem takim jak neurotoksyna może być korzystne w wykrywaniu umiejscowienia receptorów neuronalnych dotkniętych przez przedmiotową neurotoksynę. Możliwe jest także sprzężenie biotyny z sekwencją nukleotydową, taką jak informacyjny kwas rybonukleinowy (mRNA), aby znaleźć miejsce, w którym te sekwencje nukleotydowe ulegają translacji na białka lub wykryć regulację mRNA komórkowego.
Możliwe jest kupowanie biotynylowanych przeciwciał poliklonalnych lub monoklonalnych, chociaż wytwarzanie biotynylowanych przeciwciał leży w gestii wielu eksperymentatorów. Protokoły można znaleźć w Internecie, sugerując metody biotynylacji przeciwciał, chociaż najłatwiejsze do przestrzegania protokoły bezpośrednio łączą biotynę z przeciwciałem, zamiast sugerować, jak interkalować cząsteczkę rozdzielającą. Odstępniki molekularne między biotyną i związanym z nią przeciwciałem pozwalają na większe odstępy, aby wystawić więcej cząsteczek na miejsca wiązania, a te przeciwciała biotyny zwykle kupuje się, a nie wytwarza.