Was ist ein Biotin-Antikörper?
Ein Biotin-Antikörper ist entgegen der Vorstellung keine Substanz, die gegen Biotin erzeugt wird. Ein Biotin-Antikörper ist vielmehr ein Antikörper, der an Biotin konjugiert wurde. Biotin bindet stark an einen Liganden - Avidin -, der wiederum an lichtdetektierbare Moleküle wie Fluorophore konjugiert werden kann. Biotin und Avidin bilden eine der stärksten bekannten biologisch relevanten kovalenten Bindungen, weshalb Biotin- und Avidin-konjugierte Liganden / Rezeptor-Einheiten in wissenschaftlichen Studien besonders nützlich sind.
Biotin ist ein Vitamin B-Komplex - Vitamin B7. Es ist ein so kleines Molekül, dass mehrere Biotinmoleküle an einen einzelnen monoklonalen oder polyklonalen Antikörper konjugiert werden können. Die Tatsache, dass Biotin auch wasserlöslich ist, ermöglicht eine größere Vielseitigkeit in Puffersystemen als wenn es unlöslich wäre. Für eine größere Spezifität wird häufig eine monoklonale Antikörperkonjugation an Biotin gegenüber einer polyklonalen Antikörperkonjugation empfohlen. Das Biotinmolekül kann direkt an den interessierenden Antikörper gebunden sein oder es kann durch einen Molekülschwanz gebunden sein, um mehr Bewegungsfreiheit zu ermöglichen.
Der Biotinligand Avidin ist in Eialbumin enthalten. Es kann billig hergestellt und leicht isoliert werden. Mehrere Avidinmoleküle binden an jeden Biotinrezeptor und verstärken ein einzelnes Antikörpernachweissignal. Wenn ein Biotin-Antikörper an einem interessierenden Antigen haftet, kann ein Experimentator den Komplex Avidin aussetzen, das an Fluorophore konjugiert ist, wodurch der Komplex nachweisbar wird. Durch Fluoreszenzbildgebung können der Biotin-Antikörper und der Avidin-konjugierte Ligand mit einem Lichtmikroskop nachgewiesen und interessierende Antigene in situ untersucht werden .
Obwohl die Erzeugung und Verwendung eines Biotin-Antikörpers und eines fluoreszenzmarkierten Avidin-Moleküls eine übliche Lösung für den Antigennachweis ist, gibt es Alternativen, die den Biotin / Avidin-Komplex noch nutzen. Die Bindung von Biotin an einen Liganden wie ein Neurotoxin kann beim Nachweis der Plazierung von neuronalen Rezeptoren, die von dem fraglichen Neurotoxin betroffen sind, vorteilhaft sein. Es ist auch möglich, Biotin an eine Nukleotidsequenz wie Messenger-Ribonukleinsäure (mRNA) zu konjugieren, um herauszufinden, wo diese Nukleotidsequenzen in Proteine übersetzt werden, oder um die zelluläre mRNA-Regulation nachzuweisen.
Es ist möglich, biotinylierte polyklonale oder monoklonale Antikörper zu kaufen, obwohl die Produktion von biotinylierten Antikörpern innerhalb der Möglichkeiten vieler Experimentatoren liegt. Protokolle, die Methoden zur Biotinylierung von Antikörpern vorschlagen, können online gefunden werden, obwohl die am leichtesten zu befolgenden Protokolle Biotin direkt mit einem Antikörper verknüpfen, anstatt zu empfehlen, wie ein molekularer Spacer interkaliert werden kann. Molekulare Spacer zwischen Biotin und seinem assoziierten Antikörper ermöglichen einen größeren Abstand, um mehr Moleküle Bindungsstellen auszusetzen, und diese Biotin-Antikörper werden normalerweise eher gekauft als hergestellt.