Co je to biotinová protilátka?

Na rozdíl od toho, co si člověk může myslet, biotinová protilátka není látka, která je vychovávána proti biotinu. Biotinová protilátka je spíše protilátka, která byla konjugována s biotinem. Biotin se silně váže na ligand - avidin - který může být zase konjugován na molekuly detekovatelné na světlo, jako jsou fluorofory. Biotin a avidin tvoří jednu z nejsilnějších biologicky významných kovalentních vazeb, díky čemuž jsou jednotky biotin a avidinem konjugované ligand / receptor zvláště užitečné ve vědeckých studiích.

Biotin je vitamin B-komplex - vitamin B7. Je to tak malá molekula, že více biotinových molekul může být konjugováno k jediné monoklonální nebo polyklonální protilátce. Skutečnost, že biotin je také rozpustný ve vodě, umožňuje větší univerzálnost v pufrovacích systémech, než kdyby byl nerozpustný. Pro větší specifičnost se často doporučuje konjugace monoklonálních protilátek s biotinem před konjugací polyklonálních protilátek. Biotinová molekula může být přímo navázána na protilátku, která je předmětem zájmu, nebo může být spojena přes molekulární konec, což umožňuje větší volnost pohybu.

Biotinový ligand avidin se nachází ve vaječném albuminu. Lze jej levně vyrobit a snadno izolovat. Na každý biotinový receptor se naváže více molekul avidinu, čímž se zesiluje signál detekce jedné protilátky. Když biotinová protilátka ulpívá na požadovaném antigenu, experimentátor pak může vystavit komplex avidinu konjugovanému s fluorofory, čímž je komplex detekovatelný. Prostřednictvím fluorescenčního zobrazování lze biotinovou protilátku a avidinem konjugovaný ligand detekovat světelnou mikroskopií a sledované antigeny lze studovat in situ .

Přestože vytvoření a použití biotinové protilátky a fluorescenčně značené molekuly avidinu je běžným řešením pro detekci antigenu, existují alternativy, které stále využívají komplex biotin / avidin. Vazba biotinu na ligand, jako je neurotoxin, může být výhodná při detekci umístění neuronálních receptorů ovlivněných daným neurotoxinem. Je také možné konjugovat biotin s nukleotidovou sekvencí, jako je messenger ribonukleová kyselina (mRNA), aby se zjistilo, kde se tyto nukleotidové sekvence převádějí do proteinů nebo aby se detekovala regulace buněčné mRNA.

Je možné koupit biotinylované polyklonální nebo monoklonální protilátky, i když produkce biotinylovaných protilátek je ve schopnosti mnoha experimentátorů. Protokoly lze najít online, což naznačuje metody biotinylace protilátek, i když nejjednodušší protokoly přímo spojují biotin s protilátkou, spíše než naznačují, jak interkalovat molekulární spacer. Molekulární spacery mezi biotinem a jeho přidruženou protilátkou umožňují větší rozestup pro vystavení více molekul vazebným místům a tyto biotinové protilátky se obvykle kupují spíše než se vyrábějí.