Co je to biotinová protilátka?
Na rozdíl od toho, co by si člověk mohl nejprve myslet, biotinová protilátka není látkou, která je zvýšena proti biotinu. Spíše je biotinová protilátka protilátkou, která byla konjugována k biotinu. Biotin se silně váže na ligand-avidin-, který lze zase spojit s molekulami detekujícími světla, jako jsou fluorofory. Biotin a avidin tvoří jednu z nejsilnějších biologicky relevantních kovalentních vazeb známých, což je ligand/receptor konjugovaný biotin a avidin, který je obzvláště užitečný ve vědeckých studiích.
Biotin je vitamin-komplex B-vitamin B7. Je to taková malá molekula, že více molekul biotinu může být konjugováno s jedinou monoklonální nebo polyklonální protilátkou. Skutečnost, že biotin je také rozpustný ve vodě, umožňuje větší všestrannost v pufrových systémech, než kdyby byla nerozpustná. Pro větší specificitu se konjugace monoklonální protilátky s biotinem často doporučuje během konjugace polyklonální protilátky. Molekula biotinu může být přímo BOs protilátkou k zájmu, nebo může být spojen prostřednictvím molekulárního ocasu, aby umožnil větší svobodu pohybu. Může být levně vyrobeno a snadno izolováno. Více avidinových molekul se váže na každý biotinový receptor a zesiluje jediný detekční signál protilátky. Když biotinová protilátka dodržuje antigen zájmu, může experimentátor vystavit komplex avidinu konjugovaným s fluorofory, což činí komplex detekovatelný. Prostřednictvím fluorescenčního zobrazení lze biotinovou protilátku a ligand konjugovaný avidinem detekovat světelnou mikroskopií a zájmové antigeny lze studovat in situ .
Ačkoli vytváření a použití biotinové protilátky a fluorescenčně označené molekuly avidinu je běžným řešením pro detekci antigenu, existují alternativy, které stále využívají komplex biotinu/avidinu. Vázající biotin na aLigand jako neurotoxin může být výhodný při detekci umístění neuronálních receptorů postižených dotyčným neurotoxinem. Je také možné spojovat biotin na nukleotidovou sekvenci, jako je messenger ribonukleová kyselina (mRNA), zjistit, kde jsou tyto nukleotidové sekvence přeloženy do proteinů nebo detekovat regulaci buněčné mRNA.
Je možné koupit biotinylované polyklonální nebo monoklonální protilátky, ačkoli produkce biotinylované protilátky je v rámci schopnosti mnoha experimentátorů. Protokoly lze nalézt online naznačující biotinylační metody protilátek, ačkoli nejsnadněji sledovaly protokoly přímo spojovat biotin na protilátku, spíše než navrhovat, jak interkalovat molekulární spacer. Molekulární rozpěrky mezi biotinem a jeho přidruženou protilátkou umožňují většímu rozestupování vystavit více molekul vazebným místům a tyto biotinové protilátky se obvykle zakoupí spíše než vyrobeny.