Hvad er en Biotin-antistof?

I modsætning til hvad man først kunne tro, er et biotinantistof ikke et stof, der opdrages mod biotin. Snarere er et biotinantistof et antistof, der er konjugeret til biotin. Biotin binder stærkt til en ligand - avidin - som igen kan konjugeres til lysdetekterbare molekyler, såsom fluoroforer. Biotin og avidin udgør en af ​​de stærkeste biologisk relevante kovalente bindinger, der er kendt, hvilket gør biotin- og avidin-konjugeret ligand / receptor-enheder især nyttig i videnskabelige studier.

Biotin er et B-kompleks vitamin - vitamin B7. Det er et så lille molekyle, at flere biotinmolekyler kan konjugeres til et enkelt monoklonalt eller polyklonalt antistof. Den kendsgerning, at biotin også er vandopløseligt, giver større alsidighed i puffersystemer, end hvis det var uopløseligt. For større specificitet anbefales ofte monoklonalt antistof-konjugering til biotin frem for polyklonalt antistof-konjugering. Biotinmolekylet kan bindes direkte med antistoffet af interesse, eller det kan forbindes gennem en molekylær hale for at give mulighed for mere bevægelsesfrihed.

Biotinligandavidinet findes i ægalbumin. Det kan fremstilles billigt og let isoleres. Flere avidinmolekyler vil binde til hver biotinreceptor og amplificere et enkelt antistofdetektionssignal. Når et biotinantistof klæber til et antigen af ​​interesse, kan en eksperimentator derefter udsætte komplekset for avidin konjugeret til fluoroforer, hvilket gør komplekset detekterbart. Gennem fluorescerende billeddannelse kan biotinantistoffet og avidin-konjugeret ligand detekteres med lysmikroskopi, og antigener af interesse kan studeres in situ .

Selvom dannelsen og anvendelsen af ​​et biotinantistof og et fluorescerende mærket avidinmolekyle er en almindelig løsning til antigen-påvisning, findes der alternativer, der stadig bruger biotin / avidin-komplekset. Binding af biotin til en ligand som et neurotoksin kan være fordelagtigt til at detektere placering af neuronale receptorer påvirket af det pågældende neurotoksin. Det er også muligt at konjugere biotin til en nukleotidsekvens, såsom messenger ribonukleinsyre (mRNA) for at finde, hvor disse nukleotidsekvenser oversættes til proteiner eller for at detektere cellulær mRNA-regulering.

Det er muligt at købe biotinylerede polyklonale eller monoklonale antistoffer, skønt biotinyleret antistofproduktion ligger inden for mange eksperimenters evne. Protokoller kan findes online, der antyder antistofbiotinyleringsmetoder, skønt de lettest fulgte protokoller direkte binder biotin til et antistof snarere end antyder, hvordan man interkaletterer en molekylær afstandsholder. Molekylære afstandsholdere mellem biotin og dets associerede antistof muliggør større afstand til at udsætte flere molekyler for bindingssteder, og disse biotin-antistoffer købes normalt snarere end fremstilles.