Hvad er et biotinantistof?

I modsætning til hvad man først tænker, er et biotinantistof ikke et stof, der er hævet mod biotin. Snarere er et biotinantistof et antistof, der er blevet konjugeret til biotin. Biotin binder stærkt til en ligand-avidin-som på sin side kan konjugeres til let-detekterbare molekyler, såsom fluoroforer. Biotin og avidin danner en af ​​de stærkeste biologisk relevante kovalente bindinger, der er kendt, hvilket gør biotin- og avidin-konjugeret ligand/receptorenheder, især nyttige i videnskabelige studier.

biotin er et B-kompleks vitamin-vitamin B7. Det er et så lille molekyle, at flere biotinmolekyler kan konjugeres til et enkelt monoklonalt eller polyklonalt antistof. Det faktum, at biotin også er vandopløseligt, muliggør større alsidighed i buffersystemer end hvis det var uopløseligt. For større specificitet anbefales monoklonalt antistof konjugering til biotin ofte over polyklonalt antistofkonjugering. Biotinmolekylet kan være direkte Bonded med antistoffet af interesse, eller det kan forbindes gennem en molekylær hale for at muliggøre mere bevægelsesfrihed.

Biotin -ligand avidin findes i ægalbumin. Det kan laves billigt og let isoleres. Flere avidinmolekyler vil binde til hver biotinreceptor, hvilket amplificerer et enkelt antistofdetektionssignal. Når et biotin -antistof klæber til et antigen af ​​interesse, kan en eksperimentator derefter udsætte komplekset for avidin konjugeret til fluoroforer, hvilket gør det komplekse detekterbare. Gennem fluorescerende billeddannelse kan biotin-antistoffet og avidin-konjugeret ligand påvises med lysmikroskopi, og antigener af interesse kan studeres in situ .

Selvom skabelsen og anvendelse af et biotinantistof og et fluorescerende mærket avidin -molekyle er en almindelig opløsning til antigendetektion, findes der alternativer, der stadig bruger biotin/avidin -komplekset. Bindende biotin til enLigand som et neurotoksin kan være en fordel ved at påvise placering af neuronale receptorer, der er påvirket af det pågældende neurotoksin. Det er også muligt at konjugere biotin til en nukleotidsekvens, såsom messenger ribonukleinsyre (mRNA) for at finde, hvor disse nukleotidsekvenser oversættes til proteiner eller for at detektere cellulær mRNA -regulering.

Det er muligt at købe biotinyleret polyklonale eller monoklonale antistoffer, skønt biotinyleret antistofproduktion er inden for mange eksperimenters evne. Protokoller kan findes online, der antyder antistofbiotinyleringsmetoder, skønt de lettere fulgte protokoller direkte forbinder biotin til et antistof snarere end at antyde, hvordan man intercalerer en molekylær afstand. Molekylære afstandsstykker mellem biotin og dets tilknyttede antistof giver mulighed for større afstand for at udsætte flere molekyler for bindingssteder, og disse biotin -antistoffer købes normalt snarere end fremstillet.