Hva er ELISA-deteksjon?
En enzymbundet immunosorbentanalyse (ELISA) er en test utført i et immunologilaboratorium for å bestemme nivåer av protein i en biologisk prøve. ELISA-deteksjon refererer til det siste trinnet i testen der en klar løsning, eller substrat, blir tilsatt til en plastplate som inneholder bundet enzymmerket merket antistoff. Enzymet spalter underlaget og det forekommer en fargeendring. Lysabsorpsjon av den endelige fargede løsningen måles deretter på en ELISA-plateleser eller spektrofotometer.
Det er forskjellige typer ELISA-tester, hvor de to vanligste er den indirekte ELISA og fangst, eller sandwich, ELISA. Den indirekte ELISA brukes til å påvise et protein, kjent som et antistoff, i en pasients serum. Et eksempel på en indirekte ELISA-test er den humane immunsviktvirus (HIV) -testen som ble brukt for å påvise antistoffer mot HIV. Sandwich ELISA-test oppdager et protein eller antigen ved å fange det mellom to antistoffer. Påvisning av hormonet human chorionic gonadotropin (hCG), som er forhøyet under graviditet, gjøres med en sandwich-ELISA-test.
Begge testene har et ELISA deteksjonstrinn på slutten av analysen. Dette trinnet innebærer tilsetning av et antistoff som har et enzymmolekyl festet til det. Etter tilsetning av det enzymmerkede antistoff tilsettes en fargeløs oppløsning, som inneholder substratmolekylet som er spesifikt for det enzymet. Enzymet spalter substratmolekylet og løsningen endrer farge avhengig av hvilken kombinasjon som er brukt. Bestemmelse av mengden antistoff eller antigen i pasientprøven gjøres ved å måle intensiteten til fargeendringen.
Det er flere enzymsubstratkombinasjoner tilgjengelig for bruk i ELISA deteksjonstrinn. Det vanligste enzymet er pepperrotperoksidase (HRP), som blant annet kan spalte underlagsmolekylene orto-fenylendiamindihydroklorid (OPD) og tetrametylbenzidin (TMB). Spaltning av både OPD og TMB resulterer i en gul farge, og den optiske tettheten eller absorbansen av lys fra disse underlagene måles av en ELISA-plateleser. Lysabsorpsjonen til OPD måles med en bølgelengde på 490 nanometer (nm) mens TMB måles til 450 nm.
Et annet vanlig enzym som brukes i ELISA-deteksjonstrinnet er alkalisk fosfatase. Dette enzymet brukes sammen med underlaget p-nitrofenylfosfat (PNPP), og produserer også en gul løsning. PNPP absorberer lys med en bølgelengde på 405 nm.
Valg av enzymsubstratkombinasjoner er vanligvis basert på hvilke enzymmerkede antistoffer som er kommersielt tilgjengelige, samt hvilket utstyr som vil bli brukt til å måle lysabsorbering. De mange kombinasjonene som er tilgjengelige for ELISA-deteksjon, gjør ELISA-testen svært allsidig. Det er et viktig verktøy i sykdomstesting og forskningslaboratorier.