Qu'est-ce que la détection ELISA?
Un dosage immuno-enzymatique (ELISA) est un test effectué dans un laboratoire d'immunologie pour déterminer les niveaux de protéines dans un échantillon biologique. La détection ELISA fait référence à la dernière étape du test dans laquelle une solution claire, ou un substrat, est ajouté à une plaque en plastique contenant un anticorps lié à une enzyme. L'enzyme clive le substrat et un changement de couleur se produit. L'absorbance lumineuse de la solution colorée finale est ensuite mesurée sur un lecteur de plaque ELISA ou un spectrophotomètre.
Il existe différents types de tests ELISA, les deux plus courants étant l’ELISA indirect et l’analyse ELISA de capture ou de sandwich. Le test ELISA indirect est utilisé pour détecter une protéine, appelée anticorps, dans le sérum d'un patient. Le test du virus de l’immunodéficience humaine (VIH) utilisé pour détecter les anticorps anti-VIH est un exemple de test ELISA indirect. Le test ELISA en sandwich détecte une protéine, ou antigène, en la capturant entre deux anticorps. La détection de l'hormone gonadotrophine chorionique humaine (hCG), qui est élevée pendant la grossesse, est réalisée à l'aide d'un test ELISA en sandwich.
Les deux tests comportent une étape de détection ELISA à la fin du test. Cette étape implique l’addition d’un anticorps auquel est attachée une molécule d’enzyme. Après l'ajout de l'anticorps marqué par une enzyme, une solution incolore contenant la molécule de substrat spécifique de cette enzyme est ajoutée. L'enzyme coupe la molécule de substrat et la solution change de couleur en fonction de la combinaison utilisée. La détermination de la quantité d'anticorps ou d'antigène dans l'échantillon du patient est effectuée en mesurant l'intensité du changement de couleur.
Plusieurs combinaisons de substrats enzymatiques sont disponibles pour être utilisées dans l'étape de détection ELISA. L'enzyme la plus commune est la peroxydase de raifort (HRP), qui peut scinder les molécules de substrat, le dichlorhydrate d'ortho-phénylènediamine (OPD) et la tétraméthylbenzidine (TMB), entre autres. Le clivage des deux OPD et TMB donne une couleur jaune et la densité optique ou l'absorbance de la lumière de ces substrats est mesurée par un lecteur de plaques ELISA. L'absorbance lumineuse de l'OPD est mesurée à une longueur d'onde de 490 nanomètres (nm) tandis que la TMB est mesurée à 450 nm.
Une autre enzyme commune utilisée dans l'étape de détection ELISA est la phosphatase alcaline. Cette enzyme est utilisée avec le substrat de phosphate de p-nitrophényle (PNPP) et produit également une solution jaune. Le PNPP absorbe la lumière à une longueur d’onde de 405 nm.
La sélection des combinaisons de substrats enzymatiques est généralement basée sur les anticorps disponibles dans le commerce marqués par des enzymes, ainsi que sur le matériel utilisé pour mesurer l'absorption de la lumière. Les nombreuses combinaisons disponibles pour la détection ELISA rendent le test ELISA extrêmement polyvalent. C'est un outil important dans les laboratoires de tests et de recherche de maladies.