Was ist Elisa -Erkennung?
Ein Enzym, das den Immunosorbent -Assay (ELISA) verknüpft hat, ist ein Test, der in einem Immunologie -Labor durchgeführt wurde, um Proteinspiegel in einer biologischen Stichprobe zu bestimmen. Die ELISA-Erkennung bezieht sich auf den letzten Schritt des Tests, bei dem eine klare Lösung oder ein Substrat zu einer plastischen Platte gegeben wird, die gebundenes enzymmarkiertes Antikörper enthält. Das Enzym spaltet das Substrat und es tritt eine Farbänderung auf. Die leichte Absorption der endgültigen farbigen Lösung wird dann auf einem ELISA -Plattenleser oder einem Spektrophotometer gemessen. Die indirekte ELISA wird verwendet, um ein Protein, das als Antikörper bekannt ist, im Serum eines Patienten nachzuweisen. Ein Beispiel für einen indirekten ELISA -Test ist der HIV -Test (Human Immunodeficiency Virus), der zum Nachweis von Antikörpern gegen HIV verwendet wird. Der Sandwich -ELISA -Test erkennt ein Protein oder Antigen, indem es zwischen zwei Antikörpern erfasst wird. Nachweis des hormonen menschlichen Choriongonadotropin (HCG), das E istwährend der Schwangerschaft schwanger, erfolgt mit einem Sandwich -ELISA -Test.
Beide Tests haben am Ende des Assays einen ELISA -Erkennungsschritt. Dieser Schritt beinhaltet die Zugabe eines Antikörpers mit einem Enzymmolekül, das darauf gebunden ist. Nach Zugabe des Enzym-markierten Antikörpers wird eine farblose Lösung, die das für dieses Enzym spezifische Substratmolekül enthält, zugesetzt. Das Enzym spaltet das Substratmolekül und die Lösung ändert die Farbe in Abhängigkeit von der verwendeten Kombination. Die Bestimmung der Menge an Antikörper oder Antigen in der Patientenprobe erfolgt durch Messung der Intensität der Farbänderung.
Es gibt mehrere Enzymsubstratkombinationen, die im ELISA -Nachweisschritt verwendet werden können. Das häufigste Enzym ist Meerrettichperoxidase (HRP), das unter anderem die Substratmoleküle ortho-phenylendiamindihydrochlorid (OPD) und Tetramethylbenzidin (TMB) spalten kann. Spaltung beider OPDund TMB führen zu einer gelben Farbe, und die optische Dichte oder Absorption des Lichts dieser Substrate wird von einem ELISA -Plattenleser gemessen. Die Lichtabsorption von OPD wird bei einer Wellenlänge von 490 Nanometern (NM) gemessen, während TMB bei 450 nm gemessen wird.
Ein weiteres gemeinsames Enzym, das im ELISA -Nachweisschritt verwendet wird, ist die alkalische Phosphatase. Dieses Enzym wird mit dem Substrat P-Nitrophenylphosphat (PNPP) verwendet und erzeugt auch eine gelbe Lösung. PNPP absorbiert Licht bei einer Wellenlänge von 405 nm.
Selektion der Enzymsubstratkombinationen basiert normalerweise auf den im Handel erhältlichen Enzym-markierten Antikörpern sowie auf welchen Geräten zur Messung der leichten Absorption. Die vielen Kombinationen zur Erkennung von ELISA -Erkennung machen den ELISA -Test sehr vielseitig. Es ist ein wichtiges Instrument für Krankheitstests und Forschungslabors.