Was ist ELISA-Nachweis?
Ein ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) ist ein Test, der in einem immunologischen Labor durchgeführt wird, um die Proteinkonzentration in einer biologischen Probe zu bestimmen. Der ELISA-Nachweis bezieht sich auf den letzten Schritt des Tests, bei dem eine klare Lösung oder ein Substrat zu einer Kunststoffplatte gegeben wird, die gebundenen enzymmarkierten Antikörper enthält. Das Enzym spaltet das Substrat und es tritt eine Farbveränderung auf. Die Lichtabsorption der endgültigen gefärbten Lösung wird dann auf einem ELISA-Plattenlesegerät oder einem Spektrophotometer gemessen.
Es gibt verschiedene Arten von ELISA-Tests, wobei die beiden häufigsten der indirekte ELISA und der Capture- oder Sandwich-ELISA sind. Der indirekte ELISA wird verwendet, um ein Protein, das als Antikörper bekannt ist, im Serum eines Patienten nachzuweisen. Ein Beispiel für einen indirekten ELISA-Test ist der HIV-Test (Human Immunodeficiency Virus) zum Nachweis von Antikörpern gegen HIV. Der Sandwich-ELISA-Test erkennt ein Protein oder Antigen, indem es zwischen zwei Antikörpern eingefangen wird. Der Nachweis des in der Schwangerschaft erhöhten Hormons humanes Choriongonadotropin (hCG) erfolgt mit einem Sandwich-ELISA-Test.
Beide Tests haben am Ende des Tests einen ELISA-Nachweisschritt. Dieser Schritt beinhaltet die Zugabe eines Antikörpers, an den ein Enzymmolekül gebunden ist. Nach der Zugabe des enzymmarkierten Antikörpers wird eine farblose Lösung zugegeben, die das für dieses Enzym spezifische Substratmolekül enthält. Das Enzym spaltet das Substratmolekül und die Lösung ändert je nach verwendeter Kombination ihre Farbe. Die Bestimmung der Menge an Antikörper oder Antigen in der Patientenprobe erfolgt durch Messung der Intensität der Farbänderung.
Für den ELISA-Nachweis stehen mehrere Enzymsubstratkombinationen zur Verfügung. Das gebräuchlichste Enzym ist die Meerrettichperoxidase (HRP), die unter anderem die Substratmoleküle Orthophenylendiamin-Dihydrochlorid (OPD) und Tetramethylbenzidin (TMB) spalten kann. Die Spaltung von OPD und TMB führt zu einer gelben Farbe, und die optische Dichte oder Absorption von Licht dieser Substrate wird mit einem ELISA-Plattenlesegerät gemessen. Die Lichtabsorption von OPD wird bei einer Wellenlänge von 490 Nanometern (nm) gemessen, während TMB bei 450 nm gemessen wird.
Ein anderes übliches Enzym, das im ELISA-Nachweisschritt verwendet wird, ist alkalische Phosphatase. Dieses Enzym wird mit dem Substrat p-Nitrophenylphosphat (PNPP) verwendet und erzeugt auch eine gelbe Lösung. PNPP absorbiert Licht bei einer Wellenlänge von 405 nm.
Die Auswahl der Enzymsubstratkombinationen basiert normalerweise darauf, welche enzymmarkierten Antikörper im Handel erhältlich sind und welche Ausrüstung zur Messung der Lichtabsorption verwendet wird. Die vielen für den ELISA-Nachweis verfügbaren Kombinationen machen den ELISA-Test äußerst vielseitig. Es ist ein wichtiges Werkzeug in Krankheits-Test- und Forschungslabors.