Vad är ELISA -upptäckt?
Ett enzym kopplat immunosorbentanalys (ELISA) är ett test utfört i ett immunologilaboratorium för att bestämma nivåer av protein i ett biologiskt prov. ELISA-detektion hänvisar till det sista steget i testet där en tydlig lösning, eller substrat, tillsätts till en plastplatta innehållande bundet enzymmärkta antikropp. Enzymet klyver underlaget och en färgförändring inträffar. Ljusabsorbans av den slutliga färgade lösningen mäts sedan på en ELISA -plattläsare eller spektrofotometer.
Det finns olika typer av ELISA -test, varvid de två vanligaste är den indirekta ELISA och fångsten, eller smörgås, ELISA. Den indirekta ELISA används för att detektera ett protein, känt som en antikropp, i en patients serum. Ett exempel på ett indirekt ELISA -test är det humana immunbristviruset (HIV) -testet som används för att upptäcka antikroppar mot HIV. Sandwich ELISA -testet upptäcker ett protein eller antigen genom att fånga det mellan två antikroppar. Detektion av det hormonet humana korioniska gonadotropinet (HCG), vilket är ELevat under graviditeten görs med ett smörgås ELISA -test.
Båda testerna har ett ELISA -detekteringssteg i slutet av analysen. Detta steg involverar tillsats av en antikropp som har en enzymmolekyl fäst vid den. Efter tillsatsen av den enzymmärkta antikroppen tillsätts en färglös lösning, som innehåller substratmolekylen som är specifik för det enzymet, tillsättes. Enzymet klyver substratmolekylen och lösningen ändrar färg beroende på den använda kombinationen. Bestämning av mängden antikropp eller antigen i patientprovet görs genom att mäta färgförändringens intensitet.
Det finns flera enzymsubstratkombinationer tillgängliga för användning i ELISA -detekteringssteget. Det vanligaste enzymet är pepparrotsperoxidas (HRP), som kan klyva substratmolekylerna orto-fenylendiamindihydroklorid (OPD) och tetrametylbensidin (TMB), bland andra. Klyvning av båda OPDoch TMB resulterar i en gul färg, och den optiska tätheten eller absorbansen av ljus hos dessa underlag mäts av en ELISA -plattläsare. Ljusabsorbansen för OPD mäts vid en våglängd av 490 nanometer (nm) medan TMB mäts vid 450 nm.
Ett annat vanligt enzym som används i ELISA -detekteringssteget är alkaliskt fosfatas. Detta enzym används med substratet P-nitrofenylfosfat (PNPP) och producerar också en gul lösning. PNPP absorberar ljus vid en våglängd av 405 nm.
Val av enzymsubstratkombinationer baseras vanligtvis på vilka enzymmärkta antikroppar som är kommersiellt tillgängliga, liksom vilken utrustning som kommer att användas för att mäta ljusabsorbansen. De många kombinationerna som finns tillgängliga för ELISA -detektion gör ELISA -testet mycket mångsidigt. Det är ett viktigt verktyg i sjukdomstestning och forskningslaboratorier.