Vad är ELISA-upptäckt?
En enzymbunden immunosorbentanalys (ELISA) är ett test som utförs i ett immunologilaboratorium för att bestämma nivåer av protein i ett biologiskt prov. ELISA-detektion hänför sig till det sista steget i testet där en klar lösning, eller substrat, sätts till en plastplatta innehållande bunden enzymmärkt antikropp. Enzymet klyver underlaget och en färgförändring inträffar. Ljusabsorbans av den slutliga färgade lösningen mäts sedan på en ELISA-plattläsare eller spektrofotometer.
Det finns olika typer av ELISA-test, varvid de två vanligaste är den indirekta ELISA och infångningen eller smörgåsen ELISA. Den indirekta ELISA används för att detektera ett protein, känt som en antikropp, i en patients serum. Ett exempel på ett indirekt ELISA-test är det humana immunbristvirus-testet (HIV) som används för att detektera antikroppar mot HIV. Sandwich ELISA-testet detekterar ett protein eller antigen genom att fånga det mellan två antikroppar. Detektion av hormonet human chorionic gonadotropin (hCG), som är förhöjd under graviditeten, görs med ett ELISA-test av sandwich.
Båda testerna har ett ELISA-detekteringssteg i slutet av analysen. Detta steg involverar tillsats av en antikropp som har en enzymmolekyl fäst vid den. Efter tillsatsen av den enzymmärkta antikroppen tillsätts en färglös lösning innehållande den substratmolekyl som är specifik för det enzymet. Enzymet klyver substratmolekylen och lösningen ändrar färg beroende på vilken kombination som används. Bestämning av mängden antikropp eller antigen i patientprovet görs genom att mäta intensiteten för färgförändringen.
Det finns flera enzymsubstratskombinationer tillgängliga för användning i ELISA-detekteringssteget. Det vanligaste enzymet är pepparrotsperoxidas (HRP), som kan klyva underlagsmolekylerna orto-fenylendiamindihydroklorid (OPD) och tetrametylbensidin (TMB), bland andra. Spjälkning av både OPD och TMB resulterar i en gul färg, och den optiska densiteten eller absorbansen av ljus från dessa substrat mäts av en ELISA-plattläsare. Ljusabsorbansen för OPD mäts vid en våglängd av 490 nanometer (nm) medan TMB mäts vid 450 nm.
Ett annat vanligt enzym som används i ELISA-detektionssteget är alkaliskt fosfatas. Detta enzym används med substratet p-nitrofenylfosfat (PNPP) och producerar också en gul lösning. PNPP absorberar ljus vid en våglängd av 405 nm.
Val av enzymsubstratkombinationer baseras vanligtvis på vilka enzymmärkta antikroppar som är kommersiellt tillgängliga, liksom vilken utrustning som kommer att användas för att mäta ljusabsorbering. De många kombinationerna som är tillgängliga för ELISA-upptäckt gör ELISA-testet mycket mångsidigt. Det är ett viktigt verktyg i sjukdomstestning och forskningslaboratorier.