O que é detecção ELISA?
Um ensaio imunossorvente ligado a enzima (ELISA) é um teste realizado em um laboratório de imunologia para determinar os níveis de proteína em uma amostra biológica. A detecção de ELISA refere-se à etapa final do teste na qual uma solução clara ou substrato é adicionada a uma placa de plástico contendo anticorpo marcado com enzima ligado. A enzima cliva o substrato e ocorre uma mudança de cor. A absorvância da luz da solução final colorida é então medida em um leitor de placas ELISA ou espectrofotômetro.
Existem vários tipos de testes ELISA, sendo os dois mais comuns o ELISA indireto e o ELISA de captura ou sanduíche. O ELISA indireto é usado para detectar uma proteína, conhecida como anticorpo, no soro de um paciente. Um exemplo de um teste ELISA indireto é o teste do vírus da imunodeficiência humana (HIV) usado para detectar anticorpos contra o HIV. O teste ELISA sanduíche detecta uma proteína, ou antígeno, capturando-a entre dois anticorpos. A detecção do hormônio gonadotrofina coriônica humana (hCG), que é elevada durante a gravidez, é feita com um teste ELISA em sanduíche.
Ambos os testes têm uma etapa de detecção de ELISA no final do teste. Este passo envolve a adição de um anticorpo que possui uma molécula enzimática ligada a ele. Após a adição do anticorpo marcado com enzima, é adicionada uma solução incolor, contendo a molécula de substrato específica para essa enzima. A enzima cliva a molécula do substrato e a solução muda de cor dependendo da combinação usada. A determinação da quantidade de anticorpo ou antígeno na amostra do paciente é feita medindo a intensidade da mudança de cor.
Existem várias combinações de substratos enzimáticos disponíveis para uso na etapa de detecção de ELISA. A enzima mais comum é a peroxidase de rábano silvestre (HRP), que pode clivar as moléculas do substrato dicloridrato de orto-fenilenodiamina (OPD) e tetrametilbenzidina (TMB), entre outras. A clivagem do OPD e do TMB resulta em uma cor amarela, e a densidade óptica ou absorvância da luz desses substratos é medida por um leitor de placas ELISA. A absorvância da luz do OPD é medida no comprimento de onda de 490 nanômetros (nm), enquanto o TMB é medido a 450 nm.
Outra enzima comum usada na etapa de detecção de ELISA é a fosfatase alcalina. Essa enzima é usada com o substrato p-nitrofenil fosfato (PNPP) e também produz uma solução amarela. O PNPP absorve a luz no comprimento de onda de 405 nm.
A seleção das combinações de substratos enzimáticos geralmente se baseia em quais anticorpos marcados com enzimas estão disponíveis comercialmente, bem como em quais equipamentos serão usados para medir a absorvância da luz. As muitas combinações disponíveis para a detecção ELISA tornam o teste ELISA altamente versátil. É uma ferramenta importante em laboratórios de teste e pesquisa de doenças.