O que é detecção de Elisa?
Um ensaio imunossorvente ligado à enzima (ELISA) é um teste realizado em um laboratório de imunologia para determinar os níveis de proteína em uma amostra biológica. A detecção de ELISA refere-se à etapa final do teste em que uma solução clara, ou substrato, é adicionada a uma placa plástica contendo anticorpo limitado marcado com enzima. A enzima cliva o substrato e ocorre uma mudança de cor. A absorvância da luz da solução colorida final é então medida em um leitor de placas ou espectrofotômetro ELISA. Existem vários tipos de testes ELISA, com os dois mais comuns sendo a indireta Elisa e a captura, ou Sandwich, Elisa. O ELISA indireto é usado para detectar uma proteína, conhecida como anticorpo, no soro de um paciente. Um exemplo de teste ELISA indireto é o teste do vírus da imunodeficiência humana (HIV) usado para detectar anticorpos contra o HIV. O teste Sandwich ELISA detecta uma proteína, ou antígeno, capturando -o entre dois anticorpos. Detecção do hormônio gonadotrofina coriônica humana (hcg), que é elevado durante a gravidez, é feito com um teste de Sandwich ELISA.
Ambos os testes têm uma etapa de detecção ELISA no final do ensaio. Esta etapa envolve a adição de um anticorpo que possui uma molécula de enzima ligada a ele. Após a adição do anticorpo marcado com enzima, é adicionada uma solução incolor, contendo a molécula de substrato específica para essa enzima. A enzima cliva a molécula do substrato e a solução muda de cor, dependendo da combinação usada. A determinação da quantidade de anticorpo ou antígeno na amostra do paciente é feita medindo a intensidade da mudança de cor.
Existem várias combinações de substrato enzimático disponíveis para uso na etapa de detecção ELISA. A enzima mais comum é a peroxidase de rábano (HRP), que pode clorar as moléculas de substrato di-hidrocloridato de orto-fenilenodiamina (OPD) e tetrametilbenzidina (TMB), entre outros. Clivagem de ambos o OPDe o TMB resultam em uma cor amarela, e a densidade óptica ou absorvância da luz desses substratos é medida por um leitor de placas ELISA. A absorvância da luz do OPD é medida em um comprimento de onda de 490 nanômetros (nm), enquanto o TMB é medido a 450 nm.
Outra enzima comum usada na etapa de detecção ELISA é a fosfatase alcalina. Essa enzima é usada com o substrato p-nitrofenil fosfato (PNPP) e também produz uma solução amarela. PNPP absorve a luz em um comprimento de onda de 405 nm.
A seleção das combinações de substrato enzimático geralmente se baseia no que os anticorpos marcados com enzimas estão disponíveis comercialmente, bem como em que equipamento será usado para medir a absorvância da luz. As muitas combinações disponíveis para a detecção de ELISA tornam o teste ELISA altamente versátil. É uma ferramenta importante nos laboratórios de teste e pesquisa de doenças.