ELISA検出とは何ですか？

酵素リンクされた免疫吸着アッセイ（ELISA）は、生物学的サンプルのタンパク質のレベルを決定するために免疫学研究所で行われたテストです。 ELISA検出とは、透明な溶液、または基質が結合した酵素標識抗体を含むプラスチックプレートに追加されるテストの最終ステップを指します。酵素は基質を切断し、色の変化が発生します。次に、最終色の溶液の光吸光度がELISAプレートリーダーまたは分光光度計で測定されます。

さまざまなタイプのELISAテストがあります。2つの最も一般的なのは、間接的なELISAとキャプチャ、またはサンドウィッチ、ELISAです。間接ELISAは、患者の血清で抗体として知られるタンパク質を検出するために使用されます。間接ELISAテストの例は、HIVに対する抗体を検出するために使用されるヒト免疫不全ウイルス（HIV）テストです。サンドイッチELISAテストは、2つの抗体間でそれを捕獲することにより、タンパク質または抗原を検出します。ホルモンのヒト絨毛性ゴナドトロピン（HCG）の検出、e妊娠中に徴収され、サンドイッチELISAテストで行われます。

両方のテストには、アッセイの最後にELISA検出ステップがあります。このステップには、酵素分子が付着した抗体の添加が含まれます。酵素標識抗体の添加後、その酵素に特異的な基質分子を含む無色の溶液が追加されます。酵素は基質分子を切断し、使用する組み合わせに応じて溶液が色を変えます。患者サンプルの抗体または抗原の量の測定は、色の変化の強度を測定することにより行われます。

ELISA検出ステップで使用できるいくつかの酵素基質の組み合わせがあります。最も一般的な酵素は、西洋ワシンのペルオキシダーゼ（HRP）であり、これは、特に基質分子オルソフェニレンジアミンジヒアミンジヒドロ塩素（OPD）およびテトラメチルベンジジン（TMB）を切断することができます。両方のOPDの切断TMBは黄色になり、これらの基質の光の光学密度または吸光度は、ELISAプレートリーダーによって測定されます。 OPDの光吸光度は490ナノメートル（nm）の波長で測定され、TMBは450 nmで測定されます。

ELISA検出ステップで使用されるもう1つの一般的な酵素は、アルカリホスファターゼです。この酵素は、基質p-ニトロフェニルリン酸（PNPP）とともに使用され、黄色の溶液も生成されます。 PNPPは、405 nmの波長で光を吸収します。

酵素基質の組み合わせの選択は、通常、酵素標識抗体が市販されているものと、光吸光度を測定するために使用する機器に基づいています。 ELISA検出に利用できる多くの組み合わせにより、ELISAテストは非常に用途が広くなります。それは疾患検査および研究研究所の重要なツールです。