ELISA検出とは何ですか？

酵素免疫測定法（ELISA）は、免疫学研究所で実施される試験で、生体サンプル中のタンパク質のレベルを決定します。 ELISA検出とは、結合した酵素標識抗体を含むプラスチックプレートに透明な溶液または基質を加える試験の最終段階を指します。 酵素は基質を切断し、色の変化が起こります。 次に、最終着色溶液の吸光度をELISAプレートリーダーまたは分光光度計で測定します。

さまざまなタイプのELISAテストがありますが、最も一般的なのは間接ELISAとキャプチャー（サンドイッチ）ELISAの2つです。 間接ELISAは、患者の血清中の抗体として知られるタンパク質を検出するために使用されます。 間接ELISAテストの例は、HIVに対する抗体を検出するために使用されるヒト免疫不全ウイルス（HIV）テストです。 サンドイッチELISAテストでは、2つの抗体間でタンパク質または抗原を捕捉します。 妊娠中に上昇するホルモンヒト絨毛性ゴナドトロピン（hCG）の検出は、サンドイッチELISAテストで行われます。

どちらのテストにも、アッセイの最後にELISA検出ステップがあります。 このステップでは、酵素分子が付着した抗体を添加します。 酵素標識抗体の添加後、その酵素に特異的な基質分子を含む無色の溶液が添加されます。 酵素は基質分子を切断し、使用する組み合わせに応じて溶液の色が変わります。 患者サンプル中の抗体または抗原の量の決定は、色の変化の強度を測定することにより行われます。

ELISA検出ステップで使用できるいくつかの酵素基質の組み合わせがあります。 最も一般的な酵素は西洋ワサビペルオキシダーゼ（HRP）であり、これは基質分子であるオルトフェニレンジアミン二塩酸塩（OPD）およびテトラメチルベンジジン（TMB）などを切断することができます。 OPDとTMBの両方の切断は黄色になり、これらの基質の光の光学密度または吸光度はELISAプレートリーダーで測定されます。 TMBは450 nmで測定されますが、OPDの吸光度は490ナノメートル（nm）の波長で測定されます。

ELISA検出ステップで使用される別の一般的な酵素は、アルカリホスファターゼです。 この酵素は基質p-ニトロフェニルリン酸（PNPP）とともに使用され、黄色の溶液も生成します。 PNPPは、405 nmの波長の光を吸収します。

酵素基質の組み合わせの選択は、通常、どの酵素標識抗体が市販されているか、および吸光度を測定するためにどの機器が使用されるかに基づいています。 ELISA検出に使用できる多くの組み合わせにより、ELISAテストは非常に用途が広がります。 これは、病気の検査や研究室での重要なツールです。