Co to jest test ELISA w surowicy?
Test immunoenzymatyczny w surowicy (test ELISA w surowicy) jest metodą stosowaną do określenia ilości substancji biologicznej w próbce surowicy w oparciu o specyficzną interakcję między antygenem a przeciwciałem. Przykłady interesujących substancji biologicznych obejmują przeciwciało wytwarzane w odpowiedzi na infekcję wirusową, takie jak przeciwciało przeciw ludzkiemu wirusowi niedoboru odporności (HIV) lub hormonowi wskazującemu na ciążę, taki jak ludzka gonadotropina kosmówkowa (hCG) lub autoimmunologiczna przeciwciało wytwarzane w reumatoidalnym zapaleniu stawów, takie jak czynnik reumatoidalny. Zasadniczo istnieje test bezpośredni, w którym wykorzystuje się specyficzne przeciwciało do wykrywania obecności antygenu w próbce surowicy, oraz test pośredni, w którym wykorzystuje się antygen do określenia obecności przeciwciał w próbce surowicy.
W bezpośrednim teście ELISA w surowicy próbka zawierająca nieznaną ilość antygenu jest przymocowana do nieruchomej powierzchni, takiej jak probówka reakcyjna lub płytka do mikromiareczkowania, i jest inkubowana ze specyficznym przeciwciałem, które jest chemicznie połączone z enzymem. I odwrotnie, w pośrednim teście ELISA w surowicy znany antygen jest przyłączany do nieruchomej powierzchni, a następnie jest inkubowany z próbką surowicy zawierającą nieznaną ilość przeciwciała. Oczekuje się, że przeciwciało swoiste dla antygenu w próbce surowicy będzie ściśle wiązać się z unieruchomionym antygenem, natomiast przeciwciała niespecyficzne usuwa się w kolejnych etapach płukania. Ogólnie, nieruchomą powierzchnię traktuje się drugim przeciwciałem, które rozpoznaje niezmienny region wszystkich przeciwciał i które jest chemicznie połączone z enzymem. Zarówno w bezpośrednim, jak i pośrednim teście ELISA, ostatni etap polega na dodaniu substratu specyficznego dla enzymu, inicjując reakcję, która daje mierzalny sygnał, który jest wprost proporcjonalny do ilości antygenu lub przeciwciała obecnego w próbce surowicy.
Test ELISA w surowicy jest szeroko stosowanym testem z kilku powodów. Co najważniejsze, jest uważany za wiarygodny test kliniczny ze względu na specyficzność interakcji antygen-przeciwciało, a czułość tego testu pozwala na wykrycie substancji biologicznych w bardzo niskich stężeniach w surowicy. Jest przeznaczony do oceny dużej liczby próbek w tym samym czasie i dlatego jest często stosowany w operacjach na dużą skalę, takich jak badanie przesiewowe próbek od dawców krwi na obecność przeciwciał HIV. Ponadto zestawy ELISA do pomiaru powszechnie testowanych przeciwciał i antygenów są dostępne w handlu do stosowania w warunkach klinicznych lub badawczych i dogodnie zawierają wszystkie niezbędne odczynniki do przeprowadzenia pełnego eksperymentu.
Rosnący obszar badań obejmuje zastosowanie technologii ELISA w surowicy w dziedzinie wykrywania cytokin. Cytokiny to rozpuszczalne cząsteczki białka wydzielane przez układ odpornościowy, które często biorą udział w procesach zapalnych; poziomy cytokin są zatem pouczające w odniesieniu do stanów chorobowych związanych z przewlekłym stanem zapalnym, takich jak choroby serca, choroby autoimmunologiczne i choroby trawienne. Uważa się, że ocena poziomów cytokin może być w stanie odróżnić choroby zapalne jelit, takie jak choroba Leśniowskiego-Crohna i wrzodziejące zapalenie jelita grubego, i może ostatecznie być w stanie przewidzieć wynik choroby serca i reumatoidalnego zapalenia stawów.