Che cos'è un siero ELISA?
Il dosaggio sierico di immunosorbenti enzimatico (ELISA sierico) è un metodo utilizzato per determinare la quantità di una sostanza biologica in un campione di siero basandosi sull'interazione specifica tra un antigene e un anticorpo. Esempi di sostanze biologiche di interesse includono un anticorpo prodotto in risposta a un'infezione virale, come un anticorpo contro il virus dell'immunodeficienza umana (HIV) o un ormone che indica una gravidanza, come la gonadotropina corionica umana (hCG) o un'autoimmune anticorpo prodotto nell'artrite reumatoide, come il fattore reumatoide. In generale, esiste un test diretto, che utilizza un anticorpo specifico per rilevare la presenza di antigene in un campione di siero, e un test indiretto, che utilizza un antigene per determinare la presenza di anticorpi in un campione di siero.
Nel siero diretto ELISA, un campione contenente una quantità sconosciuta di antigene è attaccato a una superficie immobile, come una provetta di reazione o una piastra di microtitolazione, ed è incubato con un anticorpo specifico che è chimicamente legato a un enzima. Al contrario, nel siero indiretto ELISA, un antigene noto viene attaccato a una superficie immobile e quindi viene incubato con il campione di siero che contiene una quantità sconosciuta di anticorpo. Si prevede che l'anticorpo specifico dell'antigene nel campione di siero si leghi strettamente all'antigene immobilizzato, mentre gli anticorpi non specifici vengono rimossi nelle seguenti fasi di lavaggio. Generalmente, la superficie immobile viene trattata con un secondo anticorpo che riconosce la regione invariabile di tutti gli anticorpi e che è chimicamente legata a un enzima. Sia nell'ELISA diretto che indiretto, la fase finale consiste nell'aggiunta di un substrato specifico dell'enzima, dando inizio a una reazione che produce un segnale misurabile direttamente proporzionale alla quantità di antigene o anticorpo presente nel campione di siero.
Il siero ELISA è un test ampiamente utilizzato per diversi motivi. Ancora più importante, è considerato un test clinico affidabile a causa della specificità dell'interazione antigene-anticorpo e la sensibilità di questo test consente il rilevamento di sostanze biologiche a concentrazioni estremamente basse nel siero. È progettato per la valutazione di un gran numero di campioni contemporaneamente e quindi viene spesso utilizzato in operazioni su larga scala, come lo screening di campioni di donatori di sangue per la presenza di anticorpi anti-HIV. Inoltre, i kit ELISA che misurano anticorpi e antigeni comunemente testati sono disponibili in commercio per l'uso in contesti clinici o di ricerca e contengono convenientemente tutti i reagenti necessari per eseguire un esperimento completo.
Una crescente area di studio prevede l'applicazione della tecnologia sierica ELISA nell'area del rilevamento di citochine. Le citochine sono molecole proteiche solubili secrete dal sistema immunitario che sono spesso coinvolte in processi infiammatori; i livelli di citochine sono quindi informativi sugli stati patologici associati all'infiammazione cronica, come malattie cardiache, malattie autoimmuni e malattie digestive. Si ritiene che la valutazione dei livelli di citochine possa essere in grado di distinguere tra malattie infiammatorie intestinali, come la malattia di Crohn e la colite ulcerosa, e potrebbe eventualmente essere in grado di predire l'esito nelle malattie cardiache e nell'artrite reumatoide.