Hvad er antistofpåvisning?
Antistofpåvisning er vigtigt i medicinen for at påvise sygdom, da antistoffer er store proteiner, der kan påvise vira og bakterier. Antistofpåvisning udføres i laboratorier og i marken for at undersøge antistof- og antigenbindinger og identificere et antistof ved dets særlige farveændring, når et enzymreagerende substratmolekyle er bundet til det, mens det stadig er bundet til antigenet. Påvisningstesten er kendt som enzymbundet immunosorbentassay (ELISA). Før udviklingen af ELISA var de eneste assays radioimmunoassays, der identificerede antistoffer ved deres specifikke radioaktivitet i 1960'erne. I begyndelsen af 1970'erne blev der udviklet flere ELISA-teknikker til identificering af specifikke antistoffer.
Den indirekte Sandwich ELISA-teknik til antistofdetektion forbereder en bufret opløsning indeholdende et sygdomsantigen og binder den til en plastikplade. Derefter introduceres et primært antistof fra en patient til at binde med antigenet. Derefter introduceres et sekundært antistof med et knyttet enzym, og et substrat til enzymet tilsættes. Dette forårsager en reaktion, der ændrer enzymets farve ved at signalere de to antistoffer er bundet, hvis antistoffet fra patienten er positivt for det sygdomsantigen. Styrken ved farveændring angiver mængden af sygdom antistoffet har påvist; denne farvestyrke måles derefter kvantitativt med et spektrometer.
En anden ELISA-teknik, der er god, når prøver fra patienter er rå eller uren, er den konkurrerende ELISA, når et umærket antistof inkuberes med patientens antigenprøve. Det bundne antistof / antigen-kompleks vaskes således, at det ubundne antistof fjernes, og et sekundært antistof koblet med et enzym, der er specifikt for det primære antistof, indføres til binding med antigenet. Med tilsætning af et substrat til enzymet, hvis sygdommen detekteres af antistoffet, vil enzymet producere kromogene eller fluorescerende egenskaber som et signal. En feltprøve, der bruges af israelske læger, bruger et reagensglas fuldt af proteinfragmenter og antistoffer og introduktionen af en blå væske. Hvis den blå væske bliver rød inden for ti minutter, genkendes det bestemte antigen i prøverøret af antistoffet for den pågældende sygdom.
I vanskeligt tilgængelige områder i udviklingslande er laboratorier ikke let tilgængelige. Mange kommercielle antistofpåvisningssæt er blevet solgt til sundhedspersonale til test for tuberkulose, især pædiatrisk og human immundefektvirus / autoimmun mangelsyndrom (HIV / AIDS) relateret tuberkulose. En undersøgelse, der omfattede 68 specifikke undersøgelser, fandt, at disse sæt ikke var så pålidelige som mikroskopi med sputumudtværing.
Malaria er en anden sygdom, for hvilken antistofpåvisning bruger en fluorescerende antistoftestprocedure. Denne procedure er god til screening af bloddonorer, da transfusionsinduceret malaria muligvis ikke vises ved en simpel blodfilmundersøgelse. Hvis en patient viser gentagne blod-negative prøver, men alligevel udviser stærk symptomologi på sygdommen, kan den fluorescerende markørtest afsløre den. Når de undersøges under et mikroskop, viser antistofferne mod malaria ofte en æblegrøn farve, der er positiv for malariaparasitten.