Was ist ein Antikörperkonjugat?
Ein Antikörperkonjugat ist ein Markierungsmolekül, das in histologischen oder enzymatischen Antigennachweisassays zur Lokalisierung gebundener Antikörper verwendet werden kann. Es funktioniert, indem es physikalisch an den Antikörper gebunden oder konjugiert ist, der zum Markieren eines Antigens von Interesse verwendet wird. Ein Antikörper, der mit einem Antikörperkonjugat markiert ist, wird häufig in der Forschung verwendet, um entweder die genaue Position oder die Menge der interessierenden Proteine oder Antigene zu identifizieren, gegen die der Antikörper oder die Antikörper erzeugt wurden.
Histologische und proteomische Assays beruhen häufig auf Antikörpern als Reagens in Forschungstechniken, mit denen spezifische Proteine markiert werden können. Indem ein interessierendes Antigen oder Protein einem Antikörper ausgesetzt wird, der dagegen erzeugt wurde, können Antigene oder Proteine markiert werden. Unter Verwendung eines Antikörperkonjugats, dh eines Antikörpers, der an ein Molekül konjugiert wurde, das speziell verwendet oder synthetisiert wurde, um leicht nachgewiesen zu werden, können Antikörper auf ihren jeweiligen Antigenen identifiziert und untersucht werden. Die häufigste Art von Antikörperkonjugat ist ein fluoreszierendes Molekül, mit dem Antigene im Gewebe unter einem Fluoreszenzmikroskop identifiziert werden können. Andere Konjugate umfassen Moleküle wie Meerrettichperoxidase, die in Konjugation mit Antikörpern zur späteren Entwicklung mit Diaminobenzidin (DAB) verwendet wird.
Häufig werden Primärantikörper gegen spezifische Antigene erzeugt, während Sekundärantikörper an Markierungsmoleküle konjugiert und gegen den Primärantikörper erzeugt werden. Zum Beispiel könnte man daran interessiert sein, ein Antigen namens Antigen X zu identifizieren. Man würde dann zum Beispiel einen in einer Maus gezogenen Antikörper verwenden, der auf Antigen X reagiert und daran haftet. Um herauszufinden, wo diese primären Mausantikörper gefunden wurden und an diese Antigen X-Moleküle gebunden, wird dann ein sekundärer Antikörper verwendet - beispielsweise ein in einer Ziege gezüchteter -, der mit einem Konjugat markiert wird, das diesen sekundären Antikörper in enzymatischen oder fluoreszenzmikroskopischen Assays nachweisbar macht. Für Assays zur Lokalisierung von Antigenen unter Verwendung eines Elektronenmikroskops werden Goldpartikel häufig als Antikörperkonjugat verwendet, da sie unter Verwendung eines Elektronenstrahls nachgewiesen werden können.
Der Grund für die Verwendung von primären und sekundären Antikörpern anstelle einer Antikörperkonjugation, bei der der primäre Antikörper direkt konjugiert ist, ist die Kosteneffizienz. Die Antikörperkonjugation ist zeit- und reagenzienintensiv. Insbesondere für ungewöhnliche Antigene ist die Antikörperkonjugation an Primärantikörper die Produktionskosten nicht wert. Vielmehr können durch Verwendung der Antikörperkonjugation an sekundären Antikörpern große Mengen eines konjugierten Antikörpers auf einmal synthetisiert und in Assays mit einer Reihe von primären Antikörpern verwendet werden, die auf die Lokalisierung vieler verschiedener Antigene zugeschnitten sind, wodurch der Produktionsprozess lohnend und kostengünstig wird.
In einigen Fällen wird jedoch ein Primärantikörper markiert, um das Rauschen im Nachweissignal aufgrund der erhöhten unspezifischen Antikörperbindung, die sich aus der Verwendung mehrerer Antikörper ergibt, zu verringern. Während diese teuren, hochempfindlichen Assays immer noch diese Methode erfordern. Es ist möglich, Kits zu erwerben, mit denen ein Forscher Konjugate mit einem eigenen Antikörper seiner Wahl markieren kann, wodurch die Kosten für das Reagenz erhöht, die Protokollschritte jedoch verringert und möglicherweise das Signal-Rausch-Verhältnis im endgültigen Antikörpernachweis-Assay erhöht werden.