Qu'est-ce qu'un conjugué d'anticorps?
Un conjugué d'anticorps est une molécule de marquage qui peut être utilisée dans des tests de détection d'antigènes histologiques ou enzymatiques pour localiser des anticorps liés. Il fonctionne en étant physiquement lié ou conjugué à l'anticorps utilisé pour marquer un antigène d'intérêt. Un anticorps qui est marqué sur un conjugué d'anticorps est un outil souvent utilisé en recherche pour identifier l'emplacement exact ou la quantité de protéines ou d'antigènes d'intérêt contre lesquels l'anticorps ou les anticorps ont été produits.
Les analyses histologiques et protéomiques reposent souvent sur des anticorps en tant que réactif dans les techniques de recherche permettant de marquer des protéines spécifiques. En exposant un antigène ou une protéine d'intérêt à un anticorps qui a été dirigé contre celui-ci, des antigènes ou des protéines peuvent être marqués. En utilisant un conjugué d'anticorps - c'est-à-dire un anticorps qui a été conjugué à une molécule spécifiquement utilisée ou synthétisée pour être facilement détecté - les anticorps de leurs antigènes respectifs peuvent ensuite être identifiés et testés. Le type le plus courant de conjugué anticorps est une molécule fluorescente, permettant l'identification d'antigènes dans un tissu sous un microscope à fluorescence. D'autres conjugués comprennent des molécules telles que la peroxydase de raifort, qui est utilisée en conjonction avec des anticorps pour un développement ultérieur avec la diaminobenzidine (DAB).
Souvent, les anticorps primaires seront développés contre des antigènes spécifiques, tandis que les anticorps secondaires seront conjugués à des molécules de marquage et élevés contre l'anticorps primaire. Par exemple, on pourrait être intéressé par l’identification d’un antigène appelé Antigen X. On pourrait alors utiliser, par exemple, un anticorps élevé chez une souris qui réagit et se colle à l’antigène X. Pour pouvoir trouver où ces anticorps primaires de souris ont été trouvés et lié à ces molécules d’antigène X, on utiliserait alors un anticorps secondaire - par exemple un anticorps élevé chez une chèvre - qui serait marqué avec un conjugué permettant de détecter cet anticorps secondaire dans des dosages microscopiques enzymatiques ou fluorescents. Pour les tests de localisation d'antigènes à l'aide d'un microscope électronique, les particules d'or sont souvent utilisées en tant que conjugué d'anticorps car elles peuvent être détectées à l'aide d'un faisceau d'électrons.
La raison d'utiliser des anticorps primaires et secondaires, au lieu d'utiliser une conjugaison d'anticorps dans laquelle l'anticorps primaire est directement conjugué, est la rentabilité. La conjugaison d'anticorps est coûteuse en temps et en réactifs. Surtout pour les antigènes peu communs, la conjugaison d'anticorps sur des anticorps primaires ne vaut pas les frais de production. Plutôt, en utilisant la conjugaison d'anticorps sur des anticorps secondaires, de grandes quantités d'un anticorps conjugué peuvent être synthétisées en une fois et utilisées dans des tests avec une gamme d'anticorps primaires conçus pour localiser de nombreux antigènes différents, rendant ainsi le processus de production rentable et rentable.
Dans certains cas, cependant, un anticorps primaire sera marqué afin de réduire le bruit dans le signal de détection en raison de la liaison accrue à l'anticorps non spécifique résultant de l'utilisation de plusieurs anticorps. Bien que ces analyses coûteuses et hautement sensibles appellent toujours cette méthode. Il est possible d’acheter des kits permettant au chercheur d’étiqueter les conjugués sur leur propre anticorps, augmentant ainsi le coût du réactif, tout en réduisant les étapes du protocole et, éventuellement, en augmentant le rapport signal sur bruit dans le test final de détection d’anticorps.