O que é um conjugado de anticorpos?
Um conjugado de anticorpos é uma molécula de marcação que pode ser usada em ensaios de detecção de antígeno histológicos ou enzimáticos para localizar anticorpos ligados. Funciona sendo fisicamente anexado ou conjugado ao anticorpo que é usado para marcar um antígeno de interesse. Um anticorpo marcado para um conjugado de anticorpos é uma ferramenta frequentemente usada em pesquisa para identificar o local exato ou a quantidade de proteínas ou antígenos de interesse, contra os quais os anticorpos ou anticorpos foram criados. Ao expor um antígeno ou proteína de interesse a um anticorpo que foi elevado contra ele, antígenos ou proteínas podem ser marcados. Usando um conjugado de anticorpos - isto é, um anticorpo que foi conjugado a uma molécula usada especificamente ou sintetizada para ser facilmente detectada - os anticorpos em seus respectivos antígenos podem ser identificados e o ensaiod. O tipo mais comum de conjugado de anticorpos é uma molécula fluorescente, permitindo a identificação de antígenos no tecido sob um microscópio fluorescente. Outros conjugados incluem moléculas como o rabanete de cavalo peroxidase, que é usado em conjugação com anticorpos para desenvolvimento posterior com diaminobenzidina (dab).
Muitas vezes, anticorpos primários serão elevados contra antígenos específicos, enquanto os anticorpos secundários serão conjugados com moléculas de marcação e elevados contra o anticorpo primário. As an example, one might be interested in identifying an antigen called Antigen X. One would then use, for example, an antibody raised in a mouse that reacts and sticks to Antigen X. To be able to find where these primary mouse antibodies have found and bound to these Antigen X molecules, a secondary antibody would then be used — for example, one raised in a goat — that would be tagged with a conjugComeu que torna esse anticorpo secundário detectável em ensaios microscópicos enzimáticos ou fluorescentes. Para ensaios na localização de antígenos usando um microscópio eletrônico, as partículas de ouro são frequentemente usadas como um conjugado de anticorpos porque podem ser detectadas usando um feixe de elétrons.
O motivo do uso de anticorpos primário e secundário, em vez de usar uma conjugação de anticorpos na qual o anticorpo primário é diretamente conjugado, é a relação custo -benefício. A conjugação de anticorpos é cara em termos de tempo e reagentes. Especialmente para antígenos incomuns, a conjugação de anticorpos em anticorpos primários não vale a despesa de produção. Em vez disso, usando a conjugação de anticorpos em anticorpos secundários, grandes quantidades de um anticorpo conjugado podem ser sintetizadas de uma só vez e usadas em ensaios com uma variedade de anticorpos primários adaptados para localizar muitos antígenos diferentes, tornando o processo de produção que vale a pena e econômico.
Em alguns casos, no entanto, um anticorpo primário será marcado paraReduza o ruído no sinal de detecção devido à ligação de anticorpos não específicos que resulta do uso de múltiplos anticorpos. Embora esses ensaios caros e altamente sensíveis ainda exigirão esse método. É possível comprar kits que permitam que um pesquisador marque os conjugados com seu próprio anticorpo de escolha, aumentando o custo do reagente, mas reduzindo as etapas do protocolo e possivelmente aumentando a relação sinal/ruído no ensaio final de detecção de anticorpos.