O que é um conjugado de anticorpos?
Um conjugado de anticorpo é uma molécula de marcação que pode ser usada em ensaios histológicos ou enzimáticos de detecção de antígeno para localizar anticorpos ligados. Ele funciona por estar fisicamente ligado ou conjugado ao anticorpo usado para marcar um antígeno de interesse. Um anticorpo marcado com um conjugado de anticorpo é uma ferramenta frequentemente usada em pesquisa para identificar o local exato ou a quantidade de proteínas ou antígenos de interesse, contra os quais o anticorpo ou anticorpos foram criados.
Ensaios histológicos e proteômicos geralmente dependem de anticorpos como reagente em técnicas de pesquisa pelas quais proteínas específicas podem ser marcadas. Ao expor um antígeno ou proteína de interesse a um anticorpo que foi criado contra ele, antígenos ou proteínas podem ser marcados. Usando um conjugado de anticorpo - isto é, um anticorpo que foi conjugado com uma molécula especificamente usada ou sintetizada para ser facilmente detectada - os anticorpos em seus respectivos antígenos podem ser identificados e analisados. O tipo mais comum de conjugado de anticorpo é uma molécula fluorescente, permitindo a identificação de antígenos no tecido sob um microscópio fluorescente. Outros conjugados incluem moléculas como a peroxidase de rabanete, que é usada em conjugação com anticorpos para desenvolvimento posterior com diaminobenzidina (DAB).
Freqüentemente, anticorpos primários serão criados contra antígenos específicos, enquanto anticorpos secundários serão conjugados com moléculas marcadoras e criados contra o anticorpo primário. Como exemplo, pode-se interessar em identificar um antígeno chamado Antígeno X. Em seguida, usaria-se, por exemplo, um anticorpo criado em um mouse que reage e adere ao Antígeno X. Para encontrar onde esses anticorpos primários de camundongo foram encontrados e ligado a essas moléculas do antígeno X, um anticorpo secundário seria então usado - por exemplo, um criado em uma cabra - que seria marcado com um conjugado que torna esse anticorpo secundário detectável em ensaios microscópicos enzimáticos ou fluorescentes. Para ensaios na localização de antígenos usando um microscópio eletrônico, as partículas de ouro são frequentemente usadas como um conjugado de anticorpo porque podem ser detectadas usando um feixe de elétrons.
A razão para o uso de anticorpos primários e secundários, em vez de usar uma conjugação de anticorpos na qual o anticorpo primário é diretamente conjugado, é a relação custo-benefício. A conjugação de anticorpos é cara em termos de tempo e reagentes. Especialmente para antígenos incomuns, a conjugação de anticorpos em anticorpos primários não vale a despesa de produção. Em vez disso, usando a conjugação de anticorpos em anticorpos secundários, grandes quantidades de um anticorpo conjugado podem ser sintetizadas de uma só vez e usadas em ensaios com uma variedade de anticorpos primários adaptados para localizar muitos antígenos diferentes, tornando o processo de produção valioso e econômico.
Em alguns casos, no entanto, um anticorpo primário será marcado para reduzir o ruído no sinal de detecção devido à ligação inespecífica aumentada do anticorpo que resulta do uso de múltiplos anticorpos. Embora esses ensaios caros e altamente sensíveis ainda exijam esse método. É possível comprar kits que permitem a um pesquisador marcar conjugados com seu próprio anticorpo de escolha, aumentando o custo do reagente, mas reduzindo as etapas do protocolo e possivelmente aumentando a razão sinal-ruído no ensaio final de detecção de anticorpos.