Co je to konjugát protilátky?

Protilátkový konjugát je značkovací molekula, která může být použita v testech histologické nebo enzymatické detekce antigenu k lokalizaci vázaných protilátek. Funguje tak, že je fyzicky připojen nebo konjugován k protilátce, která se používá pro značení požadovaného antigenu. Protilátka, která je označena protilátkovým konjugátem, je nástrojem často používaným ve výzkumu k identifikaci buď přesného umístění nebo množství požadovaných proteinů nebo antigenů, proti nimž byla protilátka nebo protilátky zvýšeny.

Histologické a proteomické testy se často spoléhají na protilátky jako činidlo ve výzkumných technikách, pomocí kterých mohou být specifické proteiny značeny. Expozicí antigenu nebo proteinu, který je předmětem zájmu, protilátce, která byla proti němu zvýšena, mohou být značeny antigeny nebo proteiny. Použitím konjugátu protilátky - tj. Protilátky, která byla konjugována s molekulou specificky použitou nebo syntetizovanou, aby byla snadno detekovatelná - pak mohou být identifikovány a testovány protilátky na jejich příslušných antigenech. Nejběžnějším typem protilátkového konjugátu je fluorescenční molekula, která umožňuje identifikaci antigenů v tkáni pod fluorescenčním mikroskopem. Jiné konjugáty zahrnují molekuly, jako je křenová peroxidáza, která se používá v konjugaci s protilátkami pro pozdější vývoj s diaminobenzidinem (DAB).

Primární protilátky budou často vyvolány proti specifickým antigenům, zatímco sekundární protilátky budou konjugovány k značkovacím molekulám a zvýšeny proti primární protilátce. Jako příklad by mohl být zájem o identifikaci antigenu nazývaného Antigen X. Jeden by pak použil například protilátku vyrostlou v myši, která reaguje a drží se na Antigenu X. Aby bylo možné zjistit, kde tyto primární myší protilátky našli a navázaný na tyto molekuly antigenu X by se potom použila sekundární protilátka - například protilátka vyrostla v kozi - která by byla značena konjugátem, díky němuž bude tato sekundární protilátka detekovatelná v enzymatických nebo fluorescenčních mikroskopických testech. Pro testy lokalizace antigenů pomocí elektronového mikroskopu se často používají jako protilátkový konjugát částice zlata, protože je lze detekovat pomocí elektronového paprsku.

Důvodem použití primárních a sekundárních protilátek namísto použití konjugace protilátek, ve které je primární protilátka přímo konjugována, je nákladová efektivita. Konjugace protilátky je nákladná z hlediska času a činidel. Zejména u neobvyklých antigenů nestojí konjugace protilátek na primárních protilátkách na úkor produkce. Spíše pomocí konjugace protilátek na sekundárních protilátkách může být syntetizováno velké množství konjugované protilátky najednou a použito v testech s řadou primárních protilátek přizpůsobených k lokalizaci mnoha různých antigenů, čímž je výrobní proces nákladný a nákladově efektivní.

V některých případech však bude primární protilátka značena ke snížení šumu v detekčním signálu v důsledku zvýšené nespecifické vazby protilátky, která je výsledkem použití více protilátek. I když tyto drahé, vysoce citlivé testy budou stále vyžadovat tuto metodu. Je možné zakoupit soupravy, které umožňují výzkumníkovi značit konjugáty k jejich vlastní zvolené protilátce, což zvyšuje náklady činidla, ale snižuje kroky protokolu a případně zvyšuje poměr signál-šum v konečném testu detekce protilátek.