Cos'è un coniugato anticorpo?
Un coniugato di anticorpi è una molecola di tagging che può essere utilizzata nei test di rilevamento dell'antigene istologico o enzimatico per localizzare gli anticorpi legati. Funziona essendo fisicamente attaccato o coniugato all'anticorpo che viene utilizzato per taggare un antigene di interesse. Un anticorpo taggato in un coniugato di anticorpi è uno strumento spesso usato nella ricerca per identificare la posizione esatta o la quantità di proteine o antigeni di interesse, contro il quale l'anticorpo o gli anticorpi sono stati sollevati. Esponendo un antigene o una proteina di interesse a un anticorpo che è stato sollevato contro di esso, possono essere etichettati antigeni o proteine. Usando un coniugato di anticorpi - cioè un anticorpo che è stato coniugato con una molecola specificamente usata o sintetizzata per essere facilmente rilevata - gli anticorpi sui rispettivi antigeni possono quindi essere identificati e assistitiD. Il tipo più comune di coniugato di anticorpi è una molecola fluorescente, che consente l'identificazione di antigeni nel tessuto al microscopio fluorescente. Altri coniugati includono molecole come la perossidasi di ravanello a cavallo, che viene utilizzata in coniugazione con anticorpi per lo sviluppo successivo con diaminobenzidina (DAB).
Spesso gli anticorpi primari saranno sollevati contro antigeni specifici, mentre gli anticorpi secondari saranno coniugati a taggare molecole e sollevati contro l'anticorpo primario. Ad esempio, si potrebbe essere interessati a identificare un antigene chiamato Antigen X. Uno avrebbe usato, ad esempio, un anticorpo allevato in un topo che reagisce e si attacca all'antigene X. Per essere in grado di trovare dove si sono trovati questi anticorpi di topo primari.ha mangiato che rende questo anticorpo secondario rilevabile in saggi microscopici enzimatici o fluorescenti. Per i test nella localizzazione degli antigeni usando un microscopio elettronico, le particelle d'oro sono spesso usate come coniugata di anticorpi perché possono essere rilevate usando un fascio di elettroni.
La ragione per l'uso di anticorpi primari e secondari, invece di usare una coniugazione di anticorpi in cui è direttamente coniugato l'anticorpo primario, è l'efficacia del costo. La coniugazione degli anticorpi è costosa in termini di tempo e reagenti. Soprattutto per antigeni non comuni, la coniugazione degli anticorpi sugli anticorpi primari non vale la spesa di produzione. Piuttosto, usando la coniugazione di anticorpi su anticorpi secondari, grandi quantità di anticorpo coniugato possono essere sintetizzate contemporaneamente e utilizzate in saggi con una gamma di anticorpi primari su misura per localizzare molti antigeni diversi, rendendo il processo di produzione degno di tutto.
In alcuni casi, tuttavia, un anticorpo primario verrà taggatoRidurre il rumore nel segnale di rilevamento a causa del legame anticorpo non specifico intensificato che deriva dall'uso di anticorpi multipli. Mentre questi test costosi e altamente sensibili richiederanno comunque questo metodo. È possibile acquistare kit che consentono a un ricercatore di taggare i coniugati al proprio anticorpo di scelta, aumentando il costo del reagente, ma riducendo le fasi del protocollo e possibilmente aumentando il rapporto segnale-rumore nel test di rilevamento degli anticorpi finali.