Che cos'è un coniugato anticorpale?
Un coniugato anticorpale è una molecola di marcatura che può essere utilizzata nei test istologici o enzimatici di rilevazione dell'antigene per localizzare gli anticorpi legati. Funziona attaccato fisicamente o coniugato all'anticorpo utilizzato per contrassegnare un antigene di interesse. Un anticorpo che è taggato su un coniugato di anticorpo è uno strumento spesso utilizzato nella ricerca per identificare la posizione esatta o la quantità di proteine o antigeni di interesse, contro i quali sono stati sollevati l'anticorpo o gli anticorpi.
I saggi istologici e proteomici spesso si basano su anticorpi come reagente nelle tecniche di ricerca con cui è possibile etichettare proteine specifiche. Esponendo un antigene o una proteina di interesse a un anticorpo che è stato sollevato contro di esso, gli antigeni o le proteine possono essere etichettati. Usando un coniugato anticorpale - cioè un anticorpo che è stato coniugato con una molecola specificamente usata o sintetizzata per essere facilmente rilevata - gli anticorpi sui loro rispettivi antigeni possono quindi essere identificati e analizzati. Il tipo più comune di coniugato anticorpale è una molecola fluorescente, che consente l'identificazione di antigeni nei tessuti al microscopio fluorescente. Altri coniugati includono molecole come la perossidasi di rafano, che viene utilizzata in coniugazione con anticorpi per lo sviluppo successivo con diaminobenzidina (DAB).
Spesso gli anticorpi primari vengono sollevati contro antigeni specifici, mentre gli anticorpi secondari vengono coniugati a molecole di marcatura e sollevati contro l'anticorpo primario. Ad esempio, si potrebbe essere interessati a identificare un antigene chiamato Antigene X. Si potrebbe quindi utilizzare, ad esempio, un anticorpo sollevato in un topo che reagisce e si attacca all'Antigene X. Per essere in grado di trovare dove hanno trovato questi anticorpi primari del topo e legato a queste molecole di Antigene X, verrebbe quindi usato un anticorpo secondario - per esempio, uno allevato in una capra - che sarebbe taggato con un coniugato che rende questo anticorpo secondario rilevabile in saggi microscopici enzimatici o fluorescenti. Per i test sulla localizzazione degli antigeni mediante un microscopio elettronico, le particelle d'oro vengono spesso utilizzate come coniugato di anticorpi perché possono essere rilevate mediante un fascio di elettroni.
Il motivo dell'utilizzo di anticorpi primari e secondari, anziché utilizzare una coniugazione di anticorpi in cui l'anticorpo primario è direttamente coniugato, è la convenienza economica. La coniugazione anticorpale è costosa in termini di tempo e reagenti. Soprattutto per gli antigeni non comuni, la coniugazione di anticorpi su anticorpi primari non vale le spese di produzione. Piuttosto, usando la coniugazione di anticorpi su anticorpi secondari, grandi quantità di anticorpi coniugati possono essere sintetizzate contemporaneamente e utilizzate in analisi con una gamma di anticorpi primari su misura per localizzare molti antigeni diversi, rendendo il processo di produzione utile e conveniente.
In alcuni casi, tuttavia, un anticorpo primario verrà etichettato per ridurre il rumore nel segnale di rilevamento a causa del legame anticorpale non specifico elevato che risulta dall'uso di più anticorpi. Mentre questi saggi costosi e altamente sensibili richiederanno comunque questo metodo. È possibile acquistare kit che consentono a un ricercatore di etichettare i coniugati sul proprio anticorpo di scelta, aumentando il costo del reagente, ma riducendo le fasi del protocollo e possibilmente aumentando il rapporto segnale-rumore nel test di rilevazione dell'anticorpo finale.