Hvad er et antistof-konjugat?

Et antistofkonjugat er et mærkningsmolekyle, der kan anvendes i histologiske eller enzymatiske antigen-detekteringsassays til lokalisering af bundne antistoffer. Det fungerer ved at være fysisk bundet eller konjugeret til antistoffet, der bruges til at mærke et antigen af ​​interesse. Et antistof, der er mærket til et antistofkonjugat, er et værktøj, der ofte bruges til forskning til at identificere enten den nøjagtige placering eller mængden af ​​proteiner eller antigener af interesse, mod hvilket antistoffet eller antistofferne blev rejst.

Histologiske og proteomiske assays er ofte afhængige af antistoffer som et reagens i forskningsteknikker, hvorved specifikke proteiner kan mærkes. Ved at udsætte et antigen eller protein af interesse for et antistof, der blev frembragt mod det, kan antigener eller proteiner mærkes. Ved at bruge et antistofkonjugat - det vil sige et antistof, der er konjugeret til et molekyle specifikt anvendt eller syntetiseret for let at blive detekteret - kan antistoffer på deres respektive antigener derefter identificeres og analyseres. Den mest almindelige type antistofkonjugat er et fluorescerende molekyle, der muliggør identifikation af antigener i væv under et fluorescerende mikroskop. Andre konjugater indbefatter molekyler som perishydase til heste radise, der bruges i konjugering med antistoffer til senere udvikling med diaminobenzidin (DAB).

Ofte frembringes primære antistoffer mod specifikke antigener, mens sekundære antistoffer vil blive konjugeret til mærkningsmolekyler og frembragt mod det primære antistof. Som et eksempel kan man være interesseret i at identificere et antigen kaldet Antigen X. Man ville derefter f.eks. Bruge et antistof opvokset i en mus, der reagerer og klæber til Antigen X. For at kunne finde, hvor disse primære musantistoffer har fundet og bundet til disse Antigen X-molekyler, vil et sekundært antistof derefter blive brugt - for eksempel et opvokset i en ged - der ville blive mærket med et konjugat, der gør dette sekundære antistof detekterbart i enten enzymatiske eller fluorescerende mikroskopiske assays. Ved assays til lokalisering af antigener ved anvendelse af et elektronmikroskop anvendes guldpartikler ofte som et antistofkonjugat, fordi de kan påvises ved hjælp af en elektronstråle.

Årsagen til anvendelse af primære og sekundære antistoffer i stedet for at bruge en antistofkonjugering, hvor det primære antistof er direkte konjugeret, er omkostningseffektivitet. Antistofkonjugering er dyrt med hensyn til tid og reagenser. Især for ualmindelige antigener er antistofkonjugering på primære antistoffer ikke værd at være produktionsomkostningerne. I stedet for ved anvendelse af antistofkonjugering på sekundære antistoffer kan store mængder af et konjugeret antistof syntetiseres på en gang og bruges i assays med en række primære antistoffer, der er skræddersyet til at lokalisere mange forskellige antigener, hvilket gør produktionsprocessen værd og omkostningseffektiv.

I nogle tilfælde vil imidlertid et primært antistof blive mærket for at reducere støj i detektionssignalet på grund af den forøgede ikke-specifikke antistofbinding, der er resultatet af anvendelse af flere antistoffer. Selvom disse dyre, meget følsomme assays stadig vil kræve denne metode. Det er muligt at købe kits, der tillader en forsker at mærke konjugater til deres eget antistof efter eget valg, hvilket øger omkostningen af ​​reagenset, men reducerer protokolletrinnene og muligvis øger signal-til-støj-forholdet i det endelige antistofdetektionsassay.