Hvad er et antistofkonjugat?

Et antistofkonjugat er et mærkningsmolekyle, der kan anvendes i histologiske eller enzymatiske antigendetektionsassays til lokalisering af bundne antistoffer. Det fungerer ved at være fysisk fastgjort eller konjugeret til det antistof, der bruges til at mærke et antigen af ​​interesse. Et antistof, der er mærket til et antistofkonjugat, er et værktøj, der ofte bruges til forskning til at identificere enten den nøjagtige placering eller mængden af ​​proteiner eller antigener af interesse, mod hvilket antistoffet eller antistofferne blev hævet.

Histologiske og proteomiske assays er ofte afhængige af antistoffer som et reagenti i forskningsteknik, som specifikke proteiner kan mærkes. Ved at udsætte et antigen eller protein af interesse for et antistof, der blev hævet mod det, kan antigener eller proteiner mærkes. Ved at bruge et antistofkonjugat - det vil sige et antistof, der er blevet konjugeret til et molekyle specifikt anvendt eller syntetiseret til let at blive detekteret - kan antistoffer på deres respektive antigener derefter identificeres og assayed. Den mest almindelige type antistofkonjugat er et fluorescerende molekyle, der muliggør identifikation af antigener i væv under et fluorescerende mikroskop. Andre konjugater inkluderer molekyler som hestens radise peroxidase, der bruges i konjugering med antistoffer til senere udvikling med diaminobenzidin (DAB).

Ofte vil primære antistoffer blive hævet mod specifikke antigener, mens sekundære antistoffer vil blive konjugeret til mærkning af molekyler og hævet mod det primære antistof. Som et eksempel kan man være interesseret i at identificere et antigen kaldet Antigen X. Man vil derefter bruge for eksempel et antistof,spiste, der gør dette sekundære antistof, der kan påvises i enten enzymatisk eller fluorescerende mikroskopiske assays. Til assays i lokalisering af antigener ved hjælp af et elektronmikroskop bruges guldpartikler ofte som et antistofkonjugat, fordi de kan detekteres ved hjælp af en elektronstråle.

Årsagen til anvendelse af primære og sekundære antistoffer i stedet for at anvende en antistofkonjugering, hvor det primære antistof er direkte konjugeret, er omkostningseffektivitet. Antistofkonjugering er dyrt med hensyn til tid og reagenser. Især for usædvanlige antigener er antistofkonjugering af primære antistoffer ikke værd at udgiften for produktionen. I stedet for ved anvendelse af antistofkonjugering på sekundære antistoffer kan store mængder af et konjugeret antistof syntetiseres på én gang og anvendes i assays med en række primære antistoffer, der er skræddersyet til at lokalisere mange forskellige antigener, hvilket gør produktionsprocessen værd og omkostningseffektiv.

I nogle tilfælde vil et primært antistof blive mærket tilReducer støj i detektionssignalet på grund af det øgede ikke-specifikke antistofbinding, der er resultatet af anvendelse af flere antistoffer. Selvom denne dyre, meget følsomme assays stadig vil kræve denne metode. Det er muligt at købe sæt, der giver en forsker mulighed for at mærke konjugater til deres eget valg af antistof, hvilket øger omkostningerne ved reagenset, men reducerer protokolletrinnene og muligvis øger signal-til-støjforholdet i det endelige antistofdetektionsassay.