Vad är ett antikroppskonjugat?

Ett antikroppskonjugat är en märkningsmolekyl som kan användas i histologiska eller enzymatiska antigendetekteringsanalyser för att lokalisera bundna antikroppar. Det fungerar genom att vara fysiskt bundet eller konjugerat till antikroppen som används för att märka ett antigen av intresse. En antikropp som är märkt till ett antikroppskonjugat är ett verktyg som ofta används i forskning för att identifiera antingen den exakta platsen eller mängden proteiner eller antigen av intresse, mot vilken antikroppen eller antikropparna togs upp.

Histologiska och proteomiska analyser förlitar sig ofta på antikroppar som ett reagens i forskningstekniker genom vilka specifika proteiner kan märkas. Genom att exponera ett antigen eller protein av intresse för en antikropp som lyfts mot den kan antigen eller proteiner märkas. Genom att använda ett antikroppskonjugat - det vill säga en antikropp som har konjugerats till en molekyl som specifikt används eller syntetiserats för att lätt detekteras - kan antikroppar på deras respektive antigen identifieras och analyseras. Den vanligaste typen av antikroppskonjugat är en fluorescerande molekyl, vilket möjliggör identifiering av antigen i vävnad under ett fluorescerande mikroskop. Andra konjugat inkluderar molekyler som hästradisperoxidas, som används i konjugering med antikroppar för senare utveckling med diaminobenzidin (DAB).

Ofta kommer primära antikroppar att tas upp mot specifika antigener, medan sekundära antikroppar kommer att konjugeras till märkningsmolekyler och uppstå mot den primära antikroppen. Som ett exempel kan man vara intresserad av att identifiera ett antigen som heter Antigen X. Man skulle sedan använda till exempel en antikropp som är uppvuxen i en mus som reagerar och fastnar på Antigen X. För att kunna hitta var dessa primära musantikroppar har hittat och bundet till dessa Antigen X-molekyler, skulle en sekundär antikropp sedan användas - till exempel en som är uppvuxen i en get - som skulle märkas med ett konjugat som gör denna sekundära antikropp detekterbar i antingen enzymatiska eller fluorescerande mikroskopiska analyser. För analyser vid lokalisering av antigen med hjälp av ett elektronmikroskop används guldpartiklar ofta som ett antikroppskonjugat eftersom de kan detekteras med hjälp av en elektronstråle.

Anledningen till att använda primära och sekundära antikroppar, istället för att använda en antikroppskonjugation där den primära antikroppen är direkt konjugerad, är kostnadseffektivitet. Antikroppskonjugering är dyr med avseende på tid och reagens. Speciellt för ovanliga antigener är antikroppskonjugering på primära antikroppar inte värt produktionen. Genom att använda antikroppskonjugering på sekundära antikroppar kan snarare stora mängder av en konjugerad antikropp syntetiseras på en gång och användas i analyser med ett antal primära antikroppar anpassade för att lokalisera många olika antigener, vilket gör produktionsprocessen lönsam och kostnadseffektiv.

I vissa fall kommer emellertid en primär antikropp att märkas för att reducera bruset i detektionssignalen på grund av den ökade ospecifika antikroppsbindningen som är resultatet av användning av flera antikroppar. Även om dessa dyra, mycket känsliga analyser fortfarande kräver denna metod. Det är möjligt att köpa satser som tillåter en forskare att märka konjugat till sin egen antikropp som valts, vilket ökar kostnaden för reagenset, men reducerar protokollstegen och möjligen ökar signal-brusförhållandet i den slutliga antikroppdetekteringsanalysen.