Vad är ett antikroppskonjugat?

Ett antikroppskonjugat är en taggningsmolekyl som kan användas i histologiska eller enzymatiska antigendetekteringsanalyser för att lokalisera bundna antikroppar. Det fungerar genom att vara fysiskt fästa eller konjugerade till antikroppen som används för att märka ett antigen av intresse. En antikropp som är taggad till ett antikroppskonjugat är ett verktyg som ofta används i forskning för att identifiera antingen den exakta platsen eller mängden proteiner eller antigen av intresse, mot vilka antikroppen eller antikropparna höjdes.

histologiska och proteomiska analyser förlitar sig ofta på antikroppar som en reagent i forskningstekniker genom vilka specifika proteiner kan vara märkt. Genom att exponera ett antigen eller protein av intresse för en antikropp som höjdes mot den kan antigen eller proteiner taggas. Genom att använda en antikroppskonjugat - det vill säga en antikropp som har konjugerats till en molekyl som specifikt används eller syntetiseras för att lätt detekteras - kan antikroppar på deras respektive antigen identifieras och analyserd. Den vanligaste typen av antikroppskonjugat är en fluorescerande molekyl, vilket möjliggör identifiering av antigener i vävnad under ett fluorescerande mikroskop. Andra konjugat inkluderar molekyler som hästradperoxidas, som används i konjugering med antikroppar för senare utveckling med diaminobensidin (DAB).

Ofta kommer primära antikroppar att höjas mot specifika antigener, medan sekundära antikroppar kommer att konjugeras för att märka molekyler och höjas mot den primära antikroppen. As an example, one might be interested in identifying an antigen called Antigen X. One would then use, for example, an antibody raised in a mouse that reacts and sticks to Antigen X. To be able to find where these primary mouse antibodies have found and bound to these Antigen X molecules, a secondary antibody would then be used — for example, one raised in a goat — that would be tagged with a conjugATE som gör denna sekundära antikropp detekterbar i antingen enzymatiska eller fluorescerande mikroskopiska analyser. För analyser vid lokalisering av antigener med användning av ett elektronmikroskop används ofta guldpartiklar som en antikroppskonjugat eftersom de kan detekteras med hjälp av en elektronstråle.

Anledningen till att använda primära och sekundära antikroppar, istället för att använda en antikroppskonjugering där den primära antikroppen är direkt konjugerad, är kostnadseffektivitet. Antikroppskonjugering är dyr när det gäller tid och reagens. Speciellt för ovanliga antigener är antikroppskonjugering på primära antikroppar inte värt utgiften för produktionen. Snarare, genom att använda antikroppskonjugering på sekundära antikroppar, kan stora mängder av en konjugerad antikropp syntetiseras på en gång och användas i analyser med en rad primära antikroppar skräddarsydda för att lokalisera många olika antigener, vilket gör produktionsprocessen värdefull och kostnadseffektiv.

I vissa fall kommer dock en primär antikropp att taggas tillMinska bruset i detektionssignalen på grund av den ökade icke-specifika antikroppsbindningen som är resultatet av att använda flera antikroppar. Även om dessa dyra, mycket känsliga analyser fortfarande kommer att kräva denna metod. Det är möjligt att köpa kit som gör det möjligt för en forskare att tagga konjugat till sin egen val av antikropp, öka kostnaden för reagenset, men minska protokollstegen och eventuellt öka signal-till-brusförhållandet i den slutliga antikroppsdetekteringsanalysen.