Hva er et antistoffkonjugat?

Et antistoffkonjugat er et merkingsmolekyl som kan brukes i histologiske eller enzymatiske antigendeteksjonsanalyser for å lokalisere bundne antistoffer. Det fungerer ved å være fysisk knyttet, eller konjugert, til antistoffet som brukes til å merke et antigen av interesse. Et antistoff som er merket til et antistoffkonjugat er et verktøy som ofte brukes i forskning for å identifisere enten den nøyaktige plasseringen eller mengden proteiner eller antigener av interesse, som antistoffet eller antistoffene ble oppdratt mot.

Histologiske og proteomiske analyser er ofte avhengige av antistoffer som et reagens i forskningsteknikker der spesifikke proteiner kan merkes. Ved å eksponere et antigen eller protein av interesse for et antistoff som ble reist mot det, kan antigener eller proteiner merkes. Ved å bruke et antistoffkonjugat - det vil si et antistoff som er blitt konjugert til et molekyl spesifikt brukt eller syntetisert for å lett bli påvist - kan antistoffer på deres respektive antigener identifiseres og analyseres. Den vanligste typen antistoffkonjugat er et fluorescerende molekyl, noe som gjør det mulig å identifisere antigener i vev under et lysstoffmikroskop. Andre konjugater inkluderer molekyler som perisydase med hesteorish, som brukes i konjugering med antistoffer for senere utvikling med diaminobenzidin (DAB).

Ofte vil primære antistoffer bli frembragt mot spesifikke antigener, mens sekundære antistoffer blir konjugert til merking av molekyler og oppdratt mot det primære antistoffet. Som et eksempel kan man være interessert i å identifisere et antigen kalt Antigen X. Man vil da bruke for eksempel et antistoff oppvokst i en mus som reagerer og klistrer seg til Antigen X. For å kunne finne hvor disse primære musantistoffene har funnet og bundet til disse Antigen X-molekylene, vil deretter et sekundært antistoff bli brukt - for eksempel et oppvokst i en geit - som vil bli merket med et konjugat som gjør dette sekundære antistoffet detekterbart i enten enzymatiske eller fluorescerende mikroskopiske analyser. For analyser i lokalisering av antigener ved bruk av et elektronmikroskop, brukes ofte gullpartikler som et antistoffkonjugat fordi de kan påvises ved bruk av en elektronstråle.

Årsaken til å bruke primære og sekundære antistoffer, i stedet for å bruke en antistoffkonjugering der det primære antistoffet er direkte konjugert, er kostnadseffektivitet. Antistoffkonjugering er dyrt med tanke på tid og reagenser. Spesielt for uvanlige antigener er antistoffkonjugering på primære antistoffer ikke verdt produksjonskostnaden. Snarere ved å bruke antistoffkonjugering på sekundære antistoffer kan store mengder av et konjugert antistoff syntetiseres på en gang og brukes i analyser med en rekke primære antistoffer som er skreddersydd for å lokalisere mange forskjellige antigener, noe som gjør produksjonsprosessen verdig og kostnadseffektiv.

I noen tilfeller vil imidlertid et primært antistoff merkes for å redusere støyen i deteksjonssignalet på grunn av den økte ikke-spesifikke antistoffbindingen som følger av bruk av flere antistoffer. Selv om disse dyre, svært følsomme analysene fortsatt vil kreve denne metoden. Det er mulig å kjøpe sett som gjør det mulig for en forsker å tagge konjugater til sitt eget antistoff som velges, noe som øker kostnaden for reagenset, men reduserer protokolltrinnene og muligens øker signal-til-støyforholdet i den endelige antistoffdeteksjonsanalysen.