Wat is een antilichaamvervoeging?
Een antilichaamconjugaat is een taggingmolecuul dat kan worden gebruikt in histologische of enzymatische antigeendetectietesten om gebonden antilichamen te lokaliseren. Het functioneert door fysiek gehecht te zijn aan, of geconjugeerd, aan het antilichaam dat wordt gebruikt om een interessant antigeen te taggen. Een antilichaam dat is getagd aan een antilichaamconjugaat is een hulpmiddel dat vaak in onderzoek wordt gebruikt om de exacte locatie of de hoeveelheid interessante eiwitten of antigenen te identificeren waartegen het antilichaam of de antilichamen werden opgewekt.
Histologische en proteomische testen vertrouwen vaak op antilichamen als reagens in onderzoekstechnieken waarmee specifieke eiwitten kunnen worden gelabeld. Door een interessant antigeen of eiwit bloot te stellen aan een antilichaam dat ertegen is opgewekt, kunnen antigenen of eiwitten worden getagd. Door een antilichaamconjugaat te gebruiken - dat wil zeggen een antilichaam dat is geconjugeerd aan een molecuul dat specifiek is gebruikt of gesynthetiseerd om gemakkelijk te worden gedetecteerd - kunnen antilichamen op hun respectieve antigenen vervolgens worden geïdentificeerd en getest. Het meest voorkomende type antilichaamconjugaat is een fluorescent molecuul, dat identificatie van antigenen in weefsel onder een fluorescentiemicroscoop mogelijk maakt. Andere conjugaten omvatten moleculen zoals paardenradijs peroxidase, dat wordt gebruikt in conjugatie met antilichamen voor latere ontwikkeling met diaminobenzidine (DAB).
Vaak zullen primaire antilichamen worden opgewekt tegen specifieke antigenen, terwijl secundaire antilichamen worden geconjugeerd aan tagging-moleculen en worden opgewekt tegen het primaire antilichaam. Als een voorbeeld zou men geïnteresseerd kunnen zijn in het identificeren van een antigeen genaamd Antigen X. Men zou dan bijvoorbeeld een antilichaam kunnen gebruiken dat is opgewekt in een muis die reageert en blijft plakken aan Antigen X. Om te kunnen vinden waar deze primaire muisantilichamen zijn gevonden en gebonden aan deze antigeen X-moleculen, zou dan een secundair antilichaam worden gebruikt - bijvoorbeeld een in een geit grootgebracht - dat zou worden getagd met een conjugaat dat dit secundaire antilichaam detecteerbaar maakt in enzymatische of fluorescente microscopische testen. Voor testen bij het lokaliseren van antigenen met behulp van een elektronenmicroscoop, worden gouddeeltjes vaak gebruikt als een antilichaamconjugaat omdat ze kunnen worden gedetecteerd met behulp van een elektronenstraal.
De reden voor het gebruik van primaire en secundaire antilichamen in plaats van het gebruik van een antilichaamconjugatie waarin het primaire antilichaam direct is geconjugeerd, is kosteneffectiviteit. Antilichaam vervoeging is duur in termen van tijd en reagentia. In het bijzonder voor ongewone antigenen is antilichaamconjugatie op primaire antilichamen de productiekosten niet waard. Integendeel, door antilichaamconjugatie op secundaire antilichamen te gebruiken, kunnen grote hoeveelheden van een geconjugeerd antilichaam in één keer worden gesynthetiseerd en in tests worden gebruikt met een reeks primaire antilichamen die zijn aangepast om veel verschillende antigenen te lokaliseren, waardoor het productieproces de moeite waard en kosteneffectief is.
In sommige gevallen zal een primair antilichaam echter worden getagd om de ruis in het detectiesignaal te verminderen vanwege de verhoogde niet-specifieke antilichaambinding die het gevolg is van het gebruik van meerdere antilichamen. Hoewel deze dure, zeer gevoelige tests nog steeds om deze methode vragen. Het is mogelijk om kits te kopen waarmee een onderzoeker conjugaten aan hun eigen antilichaam naar keuze kan taggen, waardoor de kosten van het reagens toenemen, maar de protocolstappen worden verlaagd en mogelijk de signaal-ruisverhouding in de uiteindelijke antilichaamdetectietest wordt verhoogd.