タンパク質濃度測定のさまざまな方法は何ですか？

タンパク質濃度測定には何百もの異なる方法があります。生化学者が分析するタンパク質溶液の種類における信じられないほどの多様性は、あらゆるタイプのタンパク質溶液に機能する単一の普遍的な方法がない理由です。最も一般的なタンパク質アッセイは、Bradfordアッセイ、Lowryアッセイ、およびビシンコニン酸アッセイです。それにもかかわらず、タンパク質溶液とアッセイで使用されている試薬との間の潜在的な化学的非互換性を回避するために必要に応じて、無数のバリエーションが開発されています。

一般的に、タンパク質濃度測定には2つの主要なカテゴリのアッセイがあります。方法の最初のグループでは、カラフルまたは蛍光色素がタンパク質溶液に添加され、特異的にタンパク質に結合します。結合した色素は、タンパク質の量に比例するユニークな吸収波長を持っています。分光計を使用することにより、タンパク質の濃度を推定することが可能になります。

2番目アッセイのグループでは、銅（II）イオンをタンパク質の溶液に添加し、これらのイオンは銅（I）イオンに還元されます。これらの還元イオンは、タンパク質に結合することにより、カラフルな複合体を形成することができます。独自の波長での吸光度を測定することにより、タンパク質濃度も同様に推測できます。

タンパク質濃度測定の最も一般的な方法の1つは、ブラッドフォードアッセイです。このアッセイでは、クーマシーブリリアントブルーと呼ばれる赤色染料が酸性条件下でタンパク質溶液に追加されます。この染料はタンパク質に結合すると、595ナノメートルで特徴的な吸光度を持つ永久青色の複合体を形成します。

ブラッドフォードアッセイの一般的な汎用性にもかかわらず、一部のタンパク質溶液とは互換性がありません。特に、ブラッドフォードアッセイは、タンパク質とBRの精製に一般的に使用される界面活性剤であるドデシル硫酸ナトリウム（SDS）の存在によって破壊されます。溶解により細胞を排除します。この洗剤は、色素のタンパク質への結合を妨害し、その結果、信頼性の低く不正確な吸収測定値が生じます。 SDSが存在する場合、他のタイプの方法を使用する必要があります。

別の一連のタンパク質アッセイが開発されており、それらはすべてBiureTテストの変動を伴います。この反応では、タンパク質を水性塩基と銅（II）イオンと組み合わせます。これらのイオンは還元され、タンパク質によってキレート化されてカラフルな錯体を形成します。このテストを使用する2つのアッセイは、ローリーアッセイとビシンコニン酸アッセイです。

Lowryアッセイを使用して、folin-ciocalteu試薬をビューレット試験に加えます。 Folin-Ciocalteu試薬は、芳香族残基、特にトリプトファンを酸化し、750ナノメートルで複合体が強く吸収されるのに役立ちます。一方、ビシンコニン酸アッセイには、ビシンコニン酸をビューレット試験に追加することが含まれます。華氏約104°（摂氏40°）での短いインキュベーションの後、2つの同等物タンパク質の酸とペプチド結合は、単一の銅（I）イオンをキレートします。結果は、562ナノメートルで強く吸収する複合体です。

タンパク質濃度測定の方法を選択する場合、溶液に存在するさまざまな化学官能基を考慮することが重要です。特定のアミノ酸側鎖、ジスルフィド結合、および補因子の存在により、タンパク質濃度の測定が非常に不正確になります。多くの場合、タンパク質だけでなく、還元剤や洗剤などの他の試薬やバッファーも考慮する必要があります。理想的な方法は化学的に互換性があり、信頼性が高く、安価で、セットアップが簡単です。