단백질 농도 결정의 다른 방법은 무엇입니까?

단백질 농도 측정의 수백 가지 방법이 있습니다. 생화학자가 분석하는 단백질 용액의 유형의 놀라운 다양성은 모든 유형의 단백질 용액에 적합한 단일 보편적 방법이없는 이유입니다. 가장 흔한 단백질 분석은 Bradford 분석, Lowry 분석 및 비신 코닌산 분석입니다. 그럼에도 불구하고, 단백질 용액과 분석에 사용되는 시약 사이의 잠재적 인 화학적 비 호환성을 중심으로하는 데 필요한 수많은 변이가 개발되었습니다. 첫 번째 그룹의 방법에서, 화려한 또는 형광 염료를 단백질 용액에 첨가하고, 특이 적으로 단백질에 결합한다. 결합 염료는 단백질의 양에 비례하는 독특한 흡수 파장을 갖는다. 분광계를 사용하면 단백질의 농도를 추정 할 수 있습니다.

두 번째분석의 그룹은 단백질 용액에 구리 (II) 이온을 첨가하는데, 여기서 이들 이온은 구리 (I) 이온으로 감소된다. 이러한 환원 된 이온은 단백질에 결합함으로써 화려한 복합체를 형성 할 수있다. 독특한 파장에서 흡광도를 측정함으로써 단백질 농도를 유추 할 수 있습니다.

단백질 농도 측정의 가장 인기있는 방법 중 하나는 브래드 포드 분석법입니다. 이 분석에서, Coomassie Brilliant Blue라는 적색 염료가 산성 조건 하에서 단백질 용액에 첨가된다. 이 염료가 단백질에 결합함에 따라 595 나노 미터에서 특징적인 흡광도를 갖는 영구적 인 청색 복합체를 형성합니다.

브래드 포드 분석의 일반적인 다양성에도 불구하고 일부 단백질 용액과 양립 할 수 없습니다. 특히, 브래드 포드 분석은 단백질과 BR을 정제하는 데 일반적으로 사용되는 세제 인 소듐 도데 실 설페이트 (SDS)의 존재에 의해 파괴된다.용해에 의해 세포 다운. 이 세제는 단백질에 염료의 결합을 방해하여 신뢰할 수없고 부정확 한 흡수 판독 값을 초래합니다. 그렇다면 SDS가있을 때 다른 유형의 방법을 사용해야합니다.

또 다른 일련의 단백질 분석이 개발되었으며, 모두 Biuret 테스트의 변화를 포함합니다. 이 반응에서, 단백질은 수성 염기 및 구리 (II) 이온과 결합된다. 이들 이온은 단백질에 의해 감소 ​​된 다음 화려한 복합체를 형성한다. 이 시험을 사용하는 두 가지 분석법은 Lowry 분석 및 비신 코닌 산 분석법입니다.

lowry 분석을 사용하면 Folin-Ciocalteu 시약이 Biuret 테스트에 추가됩니다. Folin-Ciocalteu 시약은 방향족 잔기, 특히 트립토판을 산화시키고, 복합체가 750 나노 미터에서 강하게 흡수하도록 돕는다. 반면에 비신 코닌 산 분석법은 비 뉴 레트 시험에 비신 코닌산을 첨가하는 것을 포함한다. 약 104 ° 화씨 (40 ° Celius)에서 간단한 인큐베이션 후, 2 개의 등가물단백질의 산 및 펩티드 결합은 단일 구리 (I) 이온을 킬레이트합니다. 결과는 562 나노 미터에서 강하게 흡수하는 복합체입니다.

단백질 농도 결정을위한 방법을 선택할 때, 용액에 존재하는 다른 화학 기능 그룹을 고려하는 것이 중요합니다. 특정 아미노산 측쇄, 이황화 결합 및 보조 인자의 존재는 단백질 농도 측정을 크게 부정확하게 만들 수 있습니다. 단백질뿐만 아니라 감소 제 및 세제와 같은 다른 시약 및 완충제를 고려해야합니다. 이상적인 방법은 화학적으로 호환 될뿐만 아니라 신뢰할 수 있고 저렴하며 간단합니다.