단백질 농도 측정의 다른 방법은 무엇입니까?

단백질 농도 측정 방법은 수백 가지가 있습니다. 생화학 자들이 분석하는 단백질 솔루션 유형의 다양성은 모든 유형의 단백질 솔루션에 적합한 단일 범용 방법이없는 이유입니다. 가장 일반적인 단백질 분석은 Bradford 분석, Lowry 분석 및 bicinchoninic acid 분석입니다. 그럼에도 불구하고, 단백질 용액과 분석에 사용되는 시약 사이의 잠재적 인 화학적 비 호환성을 해결하기 위해 필요에 따라 무수한 변형이 개발되었다.

일반적으로 말하면 단백질 농도 측정에 대한 두 가지 주요 범주의 분석이 있습니다. 첫 번째 그룹의 방법에서, 다채로운 또는 형광 염료가 단백질 용액에 첨가되고, 단백질에 특이 적으로 결합한다. 결합 염료는 단백질의 양에 비례하는 고유 한 흡수 파장을 갖습니다. 분광계를 사용함으로써 단백질의 농도를 추정 할 수있게된다.

두 번째 분석 그룹은 구리 (II) 이온을 단백질 용액에 첨가하는 것을 포함하며,이 이온은 구리 (I) 이온으로 환원됩니다. 이러한 환원 된 이온은 단백질에 결합함으로써 다채로운 복합체를 형성 할 수있다. 그들의 고유 파장에서 흡광도를 측정함으로써, 단백질 농도가 마찬가지로 추론 될 수있다.

단백질 농도 측정의 가장 보편적 인 방법 중 하나는 Bradford assay입니다. 이 분석에서, 쿠마시 브릴리언트 블루 (coomassie brilliant blue) 라 불리는 적색 염료가 산성 조건 하에서 단백질 용액에 첨가된다. 이 염료는 단백질에 결합함에 따라 595 나노 미터에서 특징적인 흡광도를 가진 영구적 인 청색 복합체를 형성합니다.

Bradford 분석의 일반적인 다양성에도 불구하고 일부 단백질 용액과 호환되지 않습니다. 특히, 브래드 포드 분석은 단백질을 정제하고 용해에 의해 세포를 분해하는데 일반적으로 사용되는 세제 인 나트륨 도데 실 설페이트 (SDS)의 존재에 의해 파괴된다. 이 세제는 염료와 단백질의 결합을 방해하여 신뢰할 수없고 부정확 한 흡수 수치를 나타냅니다. 따라서 SDS가있을 때는 다른 유형의 방법을 사용해야합니다.

또 다른 일련의 단백질 분석이 개발되었으며 모두 Biuret 테스트의 변형을 포함합니다. 이 반응에서 단백질은 수성 염기 및 구리 (II) 이온과 결합됩니다. 이 이온들은 환원 된 다음 단백질에 의해 킬레이트되어 다채로운 착물을 형성합니다. 이 테스트를 사용하는 두 가지 분석은 Lowry 분석과 bicinchoninic acid 분석입니다.

Lowry 분석을 통해 Folin-Ciocalteu 시약이 Biuret 테스트에 추가됩니다. Folin-Ciocalteu 시약은 방향족 잔류 물, 특히 트립토판을 산화시키고 750 나노 미터에서 복합체가 강하게 흡수되도록합니다. 한편, 비친 코니 닉산 분석은 비 뷔렛 토닉 산을 비우 렛 시험에 첨가하는 것을 포함한다. 약 104 ° F (40 ° C)에서 잠깐 배양 한 후, 2 당량의 산과 단백질의 펩타이드 결합이 단일 구리 (I) 이온을 킬레이트합니다. 결과는 562 나노 미터에서 강하게 흡수되는 복합체입니다.

단백질 농도 측정 방법을 선택할 때 용액에 존재하는 다양한 화학 작용기를 고려하는 것이 중요합니다. 특정 아미노산 측쇄, 이황화 결합 및 보조인자가 존재하면 단백질 농도 측정이 매우 부정확해질 수 있습니다. 단백질뿐만 아니라 환원제 및 세제와 같은 다른 시약 및 완충제를 고려해야하는 경우가 종종 있습니다. 이상적인 방법은 화학적으로 호환 가능하고 안정적이고 저렴하며 간단하게 설치할 수 있습니다.