Wat is het ELISA-protocol?
Een enzymgebonden immunosorbentest (ELISA) is een veel voorkomende test die in de immunologie wordt gebruikt om antigenen of antilichamen te detecteren. Antigenen veroorzaken een immuunsysteemreactie - met andere woorden, ze veroorzaken ziekten. ELISA wordt gebruikt om veel bacteriële en virale antigenen te detecteren, waaronder het humaan immunodeficiëntievirus (HIV), malaria, cholera, mazelen en bof. Een iets ander ELISA-protocol kan worden gebruikt om antilichamen tegen deze en vele andere pathogenen te detecteren. Een ELISA-protocol is de stapsgewijze procedure voor het uitvoeren van een specifieke ELISA.
Hoewel het ELISA-protocol enigszins varieert, afhankelijk van het type ELISA dat wordt uitgevoerd, is het basisconcept voor iedereen hetzelfde. ELISA is afhankelijk van enzymgebonden antilichamen, ook wel antiglobulinen genoemd . Een signaalmolecuul dat aan deze antiglobulinen is bevestigd, veroorzaakt dat een substraat dat tijdens de test wordt toegevoegd van kleur verandert, als het gewenste antigeen of antilichaam aanwezig is. De hoeveelheid aanwezig antigeen of antilichaam is evenredig met de hoeveelheid kleurverandering, die kan worden gemeten met een elektronische plaatlezer.
Er zijn drie hoofdtypen ELISA. Een directe ELISA wordt meestal gebruikt om antigenen te detecteren in plaats van antilichamen. Dit is het eenvoudigste ELISA-protocol, omdat het enzymgebonden antilichaam direct aan het gewenste antigeen bindt. Substraat wordt vervolgens toegevoegd om de aanwezige hoeveelheid antigeen te bepalen.
Een indirecte ELISA wordt gebruikt om antilichamen te detecteren, terwijl een ander type indirecte ELISA - een sandwich ELISA genoemd - kan worden gebruikt om antigenen te detecteren. Een sandwich ELISA-protocol vereist twee antilichamen, de invang- en detectie-antilichamen, om aan het gewenste antigeen te binden. Een antiglobuline wordt toegevoegd, dat bindt aan het detectie-antilichaam en het substraat wordt toegevoegd. De indirecte ELISA volgt een soortgelijk protocol, maar gebruikt een invangantigeen in plaats van een invangantilichaam om het gewenste antilichaam te detecteren.
Competitieve ELISA wordt vaak gebruikt voor het detecteren van antigenen die aanwezig zijn in lage concentraties, omdat het een zeer gevoelige test is. In tegenstelling tot de andere ELISA-protocollen gebruikt competitieve ELISA een enzymgebonden antigeen in plaats van een antilichaam en een iets andere kwantificeringsmethode. Hierin worden het monster dat het te detecteren antigeen en het enzym-gekoppelde antigeen bevat, beide aan een antilichaam toegevoegd en concurreren de twee antigenen om antilichaambindende plaatsen. Wanneer het substraat wordt toegevoegd, is de kleurverandering groter, met een hogere verhouding van gebonden enzymgebonden antigenen tot gebonden monsterantigenen. Dit betekent dat een hogere kleurverandering wordt gedetecteerd bij lagere concentraties van het monsterantigeen, wat deze methode zo gevoelig maakt.