Was ist das ELISA-Protokoll?
Ein enzymgebundener Immunosorbens-Assay (ELISA) ist ein in der Immunologie gebräuchlicher Test zum Nachweis von Antigenen oder Antikörpern. Antigene rufen eine Reaktion des Immunsystems hervor - mit anderen Worten, sie verursachen Krankheiten. ELISA wird zum Nachweis vieler bakterieller und viraler Antigene verwendet, einschließlich des humanen Immundefizienzvirus (HIV), Malaria, Cholera, Masern und Mumps. Ein etwas anderes ELISA-Protokoll kann zum Nachweis von Antikörpern gegen diese und viele andere Krankheitserreger verwendet werden. Ein ELISA-Protokoll ist das schrittweise Verfahren zur Durchführung eines bestimmten ELISA.
Obwohl das ELISA-Protokoll je nach Art des durchgeführten ELISA geringfügig variiert, ist das Grundkonzept für alle von ihnen dasselbe. Der ELISA hängt von enzymgebundenen Antikörpern ab, die auch als Antiglobuline bezeichnet werden . Ein an diese Antiglobuline gebundenes Signalmolekül bewirkt, dass ein während des Assays zugesetztes Substrat seine Farbe ändert, wenn das gewünschte Antigen oder der gewünschte Antikörper vorhanden ist. Die Menge des vorhandenen Antigens oder Antikörpers ist proportional zur Menge der Farbänderung, die mit einem elektronischen Plattenlesegerät gemessen werden kann.
Es gibt drei Haupttypen von ELISA. Ein direkter ELISA wird normalerweise zum Nachweis von Antigenen anstelle von Antikörpern verwendet. Dies ist das einfachste ELISA-Protokoll, da der enzymgebundene Antikörper direkt an das gewünschte Antigen bindet. Das Substrat wird dann zugegeben, um die Menge des vorhandenen Antigens zu bestimmen.
Ein indirekter ELISA wird zum Nachweis von Antikörpern verwendet, während ein anderer Typ eines indirekten ELISA - Sandwich- ELISA genannt - zum Nachweis von Antigenen verwendet werden kann. Ein Sandwich-ELISA-Protokoll erfordert zwei Antikörper, die als Capture- und Detection-Antikörper bezeichnet werden, um an das gewünschte Antigen zu binden. Ein Antiglobulin wird zugesetzt, das an den Nachweisantikörper bindet, und das Substrat wird zugesetzt. Der indirekte ELISA folgt einem ähnlichen Protokoll, verwendet jedoch ein Einfangantigen anstelle eines Einfangantikörpers, um den gewünschten Antikörper nachzuweisen.
Kompetitiver ELISA wird häufig zum Nachweis von Antigenen verwendet, die in geringen Konzentrationen vorliegen, da es sich um einen sehr sensitiven Assay handelt. Im Gegensatz zu den anderen ELISA-Protokollen verwendet der kompetitive ELISA ein enzymgebundenes Antigen anstelle eines Antikörpers und eine etwas andere Quantifizierungsmethode. Darin werden die Probe, die das nachzuweisende Antigen enthält, und das enzymgebundene Antigen beide einem Antikörper zugesetzt, und die beiden Antigene konkurrieren um Antikörperbindungsstellen. Wenn das Substrat zugegeben wird, ist die Farbänderung größer, wobei ein höheres Verhältnis von gebundenen enzymgebundenen Antigenen zu gebundenen Probenantigenen vorliegt. Dies bedeutet, dass bei niedrigeren Konzentrationen des Probenantigens eine höhere Farbänderung festgestellt wird, was diese Methode so empfindlich macht.