Was ist das ELISA -Protokoll?
Ein enzymgebundener Immunosorbent-Assay (ELISA) ist ein häufiger Test in der Immunologie zum Nachweis von Antigenen oder Antikörpern. Antigene provozieren eine Reaktion des Immunsystems - mit anderen Worten, sie verursachen Krankheiten. ELISA wird verwendet, um viele bakterielle und virale Antigene nachzuweisen, einschließlich des menschlichen Immundefizienzvirus (HIV), Malaria, Cholera, Masern und Mumps. Ein leicht unterschiedliches elisa -Protokoll kann verwendet werden, um Antikörper gegen diese und viele andere Krankheitserreger nachzuweisen. Ein ELISA-Protokoll ist das Schritt-für-Schritt-Verfahren für die Durchführung einer bestimmten ELISA. ELISA hängt von enzymgebundenen Antikörpern ab, auch Antiglobuline . Ein an diesen Antiglobulinen angebrachten Signalmolekül führt dazu, dass ein Substrat während des Assays zugesetzt wird, um die Farbe zu ändern, falls das gewünschte Antigen oder Antikörper vorhanden ist. Die Menge an Antigen oder Antikörper ist proportional zur Mengeder Farbänderung, die mit einem elektronischen Plattenleser gemessen werden kann.
Es gibt drei Haupttypen von ELISA. Ein Direct elisa wird normalerweise verwendet, um Antigene als Antikörper nachzuweisen. Dies ist das einfachste ELISA-Protokoll, da der enzymgebundene Antikörper direkt an das gewünschte Antigen bindet. Substrat wird dann hinzugefügt, um die Menge der vorhandenen Antigenen zu bestimmen.
An Indirect elisa wird verwendet, um Antikörper zu erkennen, während eine andere Art von indirekter ELISA - als -Sicher -ELISA bezeichnet - zum Nachweis von Antigenen verwendet werden kann. Ein Sandwich -ELISA -Protokoll benötigt zwei Antikörper, die als Einfang- und Nachweisantikörper bezeichnet werden, um an das gewünschte Antigen zu binden. Ein Antiglobulin wird zugesetzt, das an den Nachweisantikörper bindet, und das Substrat wird zugegeben. Die indirekte ELISA folgt einem ähnlichen Protokoll, verwendet jedoch eher ein Capture -Antigen als einen Capture -Antikörper, um das D nachzuweisenAusgesiedelter Antikörper.
wettbewerbsfähige ELISA wird häufig zum Nachweis von Antigenen verwendet, die in geringen Konzentrationen vorhanden sind, da es sich um einen sehr empfindlichen Assay handelt. Im Gegensatz zu den anderen ELISA-Protokollen verwendet wettbewerbsfähige ELISA ein enzymgebundenes Antigen anstelle eines Antikörpers und eine etwas unterschiedliche Quantifizierungsmethode. Darin wird die Probe, die das zu nachgewiesene Antigen enthält, und das enzymgebundene Antigen zu einem Antikörper zugesetzt, und die beiden Antigene konkurrieren um Antikörperbindungsstellen. Wenn das Substrat zugesetzt wird, ist die Farbänderung größer, wobei ein höheres Verhältnis von gebundenen enzymgebundenen Antigenen zu gebundenen Probenantigenen. Dies bedeutet, dass eine höhere Farbänderung bei niedrigeren Konzentrationen des Probenantigens nachgewiesen wird, was diese Methode so empfindlich macht.