Vad är ELISA-protokollet?
En enzymbunden immunosorbentanalys (ELISA) är ett vanligt test som används i immunologi för att detektera antigener eller antikroppar. Antigener provocerar en immunsystemreaktion - de orsakar med andra ord sjukdomar. ELISA används för att detektera många bakteriella och virala antigener, inklusive humant immunbristvirus (HIV), malaria, kolera, mässling och kusma. Ett något annorlunda ELISA-protokoll kan användas för att detektera antikroppar mot dessa och många andra patogener. Ett ELISA-protokoll är steg-för-steg-proceduren för att utföra en specifik ELISA.
Även om ELISA-protokollet varierar något beroende på vilken typ av ELISA som utförs, är grundkonceptet detsamma för alla. ELISA beror på enzymbundna antikroppar, även kallade antiglobuliner . En signalmolekyl fäst vid dessa antiglobuliner får ett substrat som tillsätts under analysen att ändra färg, om det önskade antigenet eller antikroppen är närvarande. Mängden antigen eller antikropp som är närvarande är proportionell mot mängden färgförändring, som kan mätas med en elektronisk plattläsare.
Det finns tre huvudtyper av ELISA. En direkt ELISA används vanligtvis för att detektera antigen snarare än antikroppar. Detta är det enklaste ELISA-protokollet, eftersom den enzymbundna antikroppen binder direkt till det önskade antigenet. Substrat tillsättes sedan för att bestämma mängden närvarande antigen.
En indirekt ELISA används för att detektera antikroppar, medan en annan typ av indirekt ELISA - kallad en sandwich- ELISA - kan användas för att detektera antigener. Ett sandwich-ELISA-protokoll kräver två antikroppar, kallade infångnings- och detekteringsantikroppar, för att binda till det önskade antigenet. Ett antiglobulin tillsätts, som binder till detektionsantikroppen, och substratet tillsätts. Den indirekta ELISA följer ett liknande protokoll, men använder ett infångningsantigen snarare än en fångstantikropp för att detektera den önskade antikroppen.
Konkurrenskraftig ELISA används ofta för att detektera antigener som finns i låga koncentrationer, eftersom det är en mycket känslig analys. Till skillnad från de andra ELISA-protokollen använder konkurrerande ELISA ett enzymbundet antigen istället för en antikropp, och en något annorlunda kvantifieringsmetod. I det tillsätts provet innehållande antigenet som ska detekteras och det enzymbundna antigenet till en antikropp, och de två antigenen tävlar om antikroppsbindande ställen. När substratet tillsätts är färgförändringen större, med ett högre förhållande av bundna enzymbundna antigener till bundna provantigener. Detta innebär att högre färgförändring upptäcks vid lägre koncentrationer av provantigenet, vilket är det som gör denna metod så känslig.