O que é o protocolo ELISA?
Um ensaio imunossorvente ligado à enzima (ELISA) é um teste comum usado na imunologia para detectar antígenos ou anticorpos. Os antígenos provocam uma reação do sistema imunológico - em outras palavras, causam doenças. O ELISA é usado para detectar muitos antígenos bacterianos e virais, incluindo vírus da imunodeficiência humana (HIV), malária, cólera, sarampo e caxumba. Um protocolo ELISA ligeiramente diferente pode ser usado para detectar anticorpos para esses e a muitos outros patógenos. Um protocolo ELISA é o procedimento passo a passo para executar um ELISA específico. O ELISA depende de anticorpos ligados a enzimas, também chamados de antiglobulinas . Uma molécula de sinal ligada a essas antiglobulinas causa um substrato adicionado durante o ensaio para alterar a cor, se o antígeno ou anticorpo desejado estiver presente. A quantidade de antígeno ou anticorpo presente é proporcional à quantidadede mudança de cor, que pode ser medida com um leitor de placas eletrônicas.
Existem três tipos principais de ELISA. Um direto ELISA é geralmente usado para detectar antígenos em vez de anticorpos. Este é o protocolo ELISA mais simples, pois o anticorpo ligado à enzima se liga diretamente ao antígeno desejado. O substrato é então adicionado para determinar a quantidade de antígeno presente.
Um indireto ELISA é usado para detectar anticorpos, enquanto outro tipo de Elisa indireta - chamado um sanduíche ELISA - pode ser usado para detectar antígenos. Um protocolo Sandwich ELISA requer dois anticorpos, chamados de anticorpos de captura e detecção, para se ligar ao antígeno desejado. Uma antiglobulina é adicionada, que se liga ao anticorpo de detecção, e o substrato é adicionado. A Elisa indireta segue um protocolo semelhante, mas usa um antígeno de captura em vez de um anticorpo de captura para detectar o DAnticorpo esgotado.
Competitivo ELISA é frequentemente usado para detectar antígenos presentes em baixas concentrações, porque é um ensaio muito sensível. Em contraste com os outros protocolos ELISA, o ELISA competitivo usa um antígeno ligado a enzimas em vez de um anticorpo e um método de quantificação ligeiramente diferente. Nele, a amostra que contém o antígeno a ser detectada e o antígeno ligado à enzima é adicionado a um anticorpo, e os dois antígenos competem por locais de ligação ao anticorpo. Quando o substrato é adicionado, a mudança de cor é maior, com uma proporção mais alta de antígenos ligados a enzimas ligadas a antígenos da amostra ligada. Isso significa que uma mudança de cor mais alta é detectada em concentrações mais baixas do antígeno da amostra, que é o que torna esse método tão sensível.