Qu'est-ce que le protocole ELISA?
Un dosage immuno-enzymatique (ELISA) est un test couramment utilisé en immunologie pour détecter des antigènes ou des anticorps. Les antigènes provoquent une réaction du système immunitaire - autrement dit, ils causent des maladies. ELISA est utilisé pour détecter de nombreux antigènes bactériens et viraux, notamment le virus de l'immunodéficience humaine (VIH), le paludisme, le choléra, la rougeole et les oreillons. Un protocole ELISA légèrement différent peut être utilisé pour détecter des anticorps dirigés contre ceux-ci et de nombreux autres agents pathogènes. Un protocole ELISA est la procédure étape par étape permettant de réaliser un test ELISA spécifique.
Bien que le protocole ELISA varie légèrement en fonction du type d’ELISA utilisé, le concept de base est le même pour tous. ELISA dépend des anticorps liés aux enzymes, également appelés antiglobulines . Une molécule signal attachée à ces antiglobulines force un substrat ajouté au cours du test à changer de couleur si l'antigène ou l'anticorps souhaité est présent. La quantité d'antigène ou d'anticorps présent est proportionnelle à la quantité de changement de couleur, qui peut être mesurée avec un lecteur de plaque électronique.
Il existe trois principaux types d’ELISA. Un test ELISA direct est généralement utilisé pour détecter des antigènes plutôt que des anticorps. C'est le protocole ELISA le plus simple, car l'anticorps lié à une enzyme se lie directement à l'antigène souhaité. Le substrat est ensuite ajouté pour déterminer la quantité d'antigène présent.
Un ELISA indirect est utilisé pour détecter les anticorps, tandis qu'un autre type d'ELISA indirect - appelé ELISA en sandwich - peut être utilisé pour détecter des antigènes. Un protocole ELISA en sandwich nécessite deux anticorps, appelés anticorps de capture et anticorps de détection, pour se lier à l'antigène souhaité. Un antiglobuline est ajouté, qui se lie à l'anticorps de détection, et le substrat est ajouté. Le test ELISA indirect suit un protocole similaire, mais utilise un antigène de capture plutôt qu'un anticorps de capture afin de détecter l'anticorps souhaité.
ELISA compétitif est souvent utilisé pour détecter les antigènes présents à de faibles concentrations, car il s’agit d’un dosage très sensible. Contrairement aux autres protocoles ELISA, la méthode ELISA compétitive utilise un antigène lié à une enzyme au lieu d'un anticorps et une méthode de quantification légèrement différente. Dans celui-ci, l'échantillon contenant l'antigène à détecter et l'antigène lié à une enzyme sont tous deux ajoutés à un anticorps et les deux antigènes entrent en compétition pour les sites de liaison à l'anticorps. Lorsque le substrat est ajouté, le changement de couleur est plus important, avec un rapport plus élevé d’antigènes liés à une enzyme liés à des antigènes d’échantillon liés. Cela signifie qu'un changement de couleur plus important est détecté à des concentrations plus faibles de l'antigène de l'échantillon, ce qui rend cette méthode si sensible.