Co je protokol ELISA?
Enzymaticky vázaný imunosorbentový test (ELISA) je běžný test používaný v imunologii k detekci antigenů nebo protilátek. Antigeny vyvolávají reakci imunitního systému - jinými slovy způsobují nemoci. ELISA se používá k detekci mnoha bakteriálních a virových antigenů, včetně viru lidské imunodeficience (HIV), malárie, cholery, spalniček a příušnic. K detekci protilátek proti těmto a mnoha dalším patogenům lze použít mírně odlišný protokol ELISA . Protokol ELISA je postupný postup pro provádění specifické ELISA.
Ačkoli se protokol ELISA mírně liší, v závislosti na typu prováděného testu ELISA je základní koncept stejný pro všechny z nich. ELISA závisí na protilátkách spojených s enzymy, které se také nazývají antiglobuliny . Signální molekula připojená k těmto antiglobulinům způsobuje, že substrát přidávaný během testu mění barvu, pokud je přítomen požadovaný antigen nebo protilátka. Množství přítomného antigenu nebo protilátky je úměrné množství změny barvy, které lze měřit pomocí elektronické čtečky destiček.
Existují tři hlavní typy ELISA. Přímá ELISA se obvykle používá k detekci antigenů spíše než protilátek. Toto je nejjednodušší protokol ELISA, protože protilátka vázaná na enzym se váže přímo na požadovaný antigen. Poté se přidá substrát pro stanovení množství přítomného antigenu.
K detekci protilátek se používá nepřímá ELISA, zatímco k detekci antigenů lze použít jiný typ nepřímé ELISA - nazývaný sendvičová ELISA. Protokol sendvičové ELISA vyžaduje, aby se dvě protilátky, nazývané zachytávací a detekční protilátky, vážily na požadovaný antigen. Přidá se antigenlobulin, který se váže na detekční protilátku a přidá se substrát. Nepřímá ELISA se řídí podobným protokolem, ale k detekci požadované protilátky používá spíše zachytávací antigen než zachytávací protilátku.
Konkurenční ELISA se často používá k detekci antigenů, které jsou přítomny v nízkých koncentracích, protože se jedná o velmi citlivý test. Na rozdíl od ostatních protokolů ELISA, konkurenční ELISA používá místo protilátky antigen s enzymem a mírně odlišnou kvantifikační metodu. V něm se vzorek obsahující antigen, který má být detekován, a enzymově spojený antigen přidají k protilátce a oba antigeny soutěží o vazebná místa pro protilátku. Když je přidán substrát, změna barvy je větší, s vyšším poměrem vázaných enzymově vázaných antigenů k vázaným antigenům vzorku. To znamená, že při nižších koncentracích vzorku antigenu je detekována vyšší změna barvy, což je tato metoda tak citlivá.