Co je protokol ELISA?
Enzymový imunosorbent test (ELISA) je běžný test používaný v imunologii k detekci antigenů nebo protilátek. Antigeny vyvolávají reakci imunitního systému - jinými slovy způsobují nemoci. ELISA se používá k detekci mnoha bakteriálních a virových antigenů, včetně viru lidské imunodeficience (HIV), malárie, cholery, spalniček a příušnic. K detekci protilátek vůči těmto a mnoha dalším patogenům lze použít mírně odlišný ELISA protokol. Protokol ELISA je postup postupného kroku pro provádění specifické ELISA.
Ačkoli protokol ELISA se mírně liší, v závislosti na typu prováděné ELISA je základní koncept stejný pro všechny z nich. ELISA závisí na protilátkách vázaných na enzym, také nazývané antiglobuliny . Molekula signálu připojená k těmto antiglobulinám způsobuje, že během testu se změní barvu, pokud je přítomna požadovaná antigen nebo protilátka. Množství přítomné antigenové nebo protilátky je úměrné množstvízměny barvy, kterou lze měřit pomocí čtečky elektronických desek.
Existují tři hlavní typy ELISA. A Direct ELISA se obvykle používá k detekci antigenů spíše než protilátek. Toto je nejjednodušší protokol ELISA, protože enzymová protilátka se váže přímo na požadovaný antigen. Substrát se poté přidá, aby se určilo množství přítomného antigenu.
nepřímá ELISA se používá k detekci protilátek, zatímco k detekci antigenů lze použít jiný typ nepřímé ELISA - nazývaný sendvič ELISA. Protokol sendvičových ELISA vyžaduje dvě protilátky nazývané protilátky pro zachycení a detekce, aby se vázaly na požadovaný antigen. Přidá se antiglobulin, který se váže na detekční protilátku a přidá se substrát. Nepřímá ELISA sleduje podobný protokol, ale používá spíše zachycovací antigen než zachycovací protilátku, aby detekoval dESIRED protilátka.
konkurenční ELISA se často používá pro detekci antigenů, které jsou přítomny v nízkých koncentracích, protože se jedná o velmi citlivý test. Na rozdíl od ostatních protokolů ELISA používá konkurenční ELISA místo protilátky a mírně odlišné kvantifikační metody. V něm se vzorek obsahující antigen, který má být detekován, a enzymově vázaný antigen se přidává do protilátky a dva antigeny soutěží o místa vázající protilátku. Při přidání substrátu je změna barvy větší, s vyšším poměrem vázaných enzymově vázaných antigenů na vázání vzorkovacích antigenů. To znamená, že vyšší změna barvy je detekována při nižších koncentracích antigenu vzorku, což je to, co dělá tuto metodu tak citlivou.