Hva er ELISA-protokoll?
En enzymbundet immunosorbentanalyse (ELISA) er en vanlig test brukt i immunologi for å påvise antigener eller antistoffer. Antigener provoserer en reaksjon på immunsystemet - med andre ord, de forårsaker sykdommer. ELISA brukes til å påvise mange bakterielle og virale antigener, inkludert humant immunsviktvirus (HIV), malaria, kolera, meslinger og kusma. En litt annen ELISA-protokoll kan brukes til å oppdage antistoffer mot disse og mange andre patogener. En ELISA-protokoll er trinnvis prosedyre for å utføre en spesifikk ELISA.
Selv om ELISA-protokollen varierer litt, avhengig av hvilken type ELISA som utføres, er det grunnleggende konseptet det samme for dem alle. ELISA er avhengig av enzymkoblede antistoffer, også kalt antiglobuliner . Et signalmolekyl festet til disse antiglobulinene får et substrat som er tilsatt under analysen til å endre farge, hvis det ønskede antigenet eller antistoffet er til stede. Mengden antigen eller antistoff som er til stede er proporsjonalt med mengden fargeendring, som kan måles med en elektronisk plateleser.
Det er tre hovedtyper av ELISA. En direkte ELISA brukes vanligvis til å påvise antigener i stedet for antistoffer. Dette er den enkleste ELISA-protokollen, ettersom enzymbundet antistoff binder direkte til ønsket antigen. Substrat blir deretter tilsatt for å bestemme mengden antigen som er til stede.
En indirekte ELISA brukes til å oppdage antistoffer, mens en annen type indirekte ELISA - kalt en sandwich ELISA - kan brukes til å oppdage antigener. En sandwich-ELISA-protokoll krever to antistoffer, kalt fangst- og deteksjonsantistoffer, for å binde seg til det ønskede antigenet. Et antiglobulin tilsettes, som binder til deteksjonsantistoffet, og underlaget tilsettes. Den indirekte ELISA følger en lignende protokoll, men bruker et fangende antigen i stedet for et fangende antistoff for å påvise det ønskede antistoffet.
Konkurransedyktig ELISA brukes ofte for å påvise antigener som er til stede i lave konsentrasjoner, fordi det er en veldig følsom analyse. I motsetning til de andre ELISA-protokollene, bruker konkurrerende ELISA et enzymbundet antigen i stedet for et antistoff, og en litt annen kvantifiseringsmetode. I den blir prøven som inneholder antigenet som skal oppdages og det enzymbundne antigenet tilsatt begge et antistoff, og de to antigenene konkurrerer om antistoffbindingsseter. Når underlaget tilsettes, er fargeendringen større, med et høyere forhold mellom bundne enzymbundne antigener og bundne prøveantigener. Dette betyr at høyere fargeendring blir oppdaget ved lavere konsentrasjoner av prøveantigenet, som er det som gjør denne metoden så følsom.