Cos'è il protocollo ELISA?
Un test immunosorbente legato all'enzima (ELISA) è un test comune usato nell'immunologia per rilevare antigeni o anticorpi. Gli antigeni provocano una reazione del sistema immunitario - in altre parole, causano malattie. L'ELISA viene utilizzato per rilevare molti antigeni batterici e virali, tra cui virus dell'immunodeficienza umana (HIV), malaria, colera, morbillo e paroti. Un protocollo ELISA leggermente diverso può essere usato per rilevare anticorpi a questi e molti altri agenti patogeni. Un protocollo ELISA è la procedura passo-passo per eseguire una specifica ELISA.
Sebbene il protocollo ELISA varia leggermente, a seconda del tipo di ELISA eseguito, il concetto di base è lo stesso per tutti loro. ELISA dipende dagli anticorpi collegati agli enzimi, chiamati anche antiglobuline . Una molecola di segnale attaccata a queste antiglobuline provoca un substrato aggiunto durante il dosaggio per cambiare colore, se è presente l'antigene o l'anticorpo desiderato. La quantità di antigene o anticorpo presente è proporzionale all'importodi cambiamento di colore, che può essere misurato con un lettore di piastre elettroniche.
Esistono tre tipi principali di ELISA. A ELISA diretto viene solitamente usato per rilevare antigeni anziché anticorpi. Questo è il protocollo ELISA più semplice, poiché l'anticorpo legato all'enzima si lega direttamente all'antigene desiderato. Il substrato viene quindi aggiunto per determinare la quantità di antigene presente.
an indiretto ELISA viene utilizzato per rilevare anticorpi, mentre un altro tipo di ELISA indiretto - chiamato sandwich ELISA - può essere usato per rilevare gli antigeni. Un protocollo ELISA sandwich richiede due anticorpi, chiamati anticorpi di cattura e rilevamento, per legarsi all'antigene desiderato. Viene aggiunta un'antiglobulina, che si lega all'anticorpo di rilevamento e viene aggiunto il substrato. L'ELISA indiretto segue un protocollo simile, ma usa un antigene di cattura piuttosto che un anticorpo di cattura per rilevare il dAnticorpo ESIrato.
ELISA competitivo è spesso usato per rilevare antigeni presenti in basse concentrazioni, perché è un test molto sensibile. Contrariamente agli altri protocolli ELISA, ELISA competitivo utilizza un antigene collegato all'enzima anziché un anticorpo e un metodo di quantificazione leggermente diverso. In esso, il campione contenente l'antigene da rilevare e l'antigene collegato all'enzima viene entrambi aggiunto a un anticorpo e i due antigeni competono per i siti di legame anticorpale. Quando viene aggiunto il substrato, la variazione del colore è maggiore, con un rapporto più elevato di antigeni legati all'enzima legato agli antigeni campione legati. Ciò significa che viene rilevato un cambiamento di colore più elevato a concentrazioni più basse dell'antigene del campione, che è ciò che rende questo metodo così sensibile.