Cos'è il protocollo ELISA?
Un saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) è un test comune utilizzato in immunologia per rilevare antigeni o anticorpi. Gli antigeni provocano una reazione del sistema immunitario - in altre parole, causano malattie. ELISA è usato per rilevare molti antigeni batterici e virali, incluso il virus dell'immunodeficienza umana (HIV), la malaria, il colera, il morbillo e la parotite. Un protocollo ELISA leggermente diverso può essere utilizzato per rilevare anticorpi verso questi e molti altri agenti patogeni. Un protocollo ELISA è la procedura dettagliata per eseguire un ELISA specifico.
Sebbene il protocollo ELISA vari leggermente, a seconda del tipo di ELISA eseguito, il concetto di base è lo stesso per tutti. L'ELISA dipende dagli anticorpi collegati agli enzimi, chiamati anche antiglobuline . Una molecola di segnale attaccata a queste antiglobuline fa sì che un substrato aggiunto durante il dosaggio cambi colore, se è presente l'antigene o l'anticorpo desiderato. La quantità di antigene o anticorpo presente è proporzionale alla quantità di variazione di colore, che può essere misurata con un lettore di piastre elettronico.
Esistono tre tipi principali di ELISA. Un ELISA diretto viene solitamente utilizzato per rilevare antigeni piuttosto che anticorpi. Questo è il protocollo ELISA più semplice, poiché l'anticorpo legato all'enzima si lega direttamente all'antigene desiderato. Il substrato viene quindi aggiunto per determinare la quantità di antigene presente.
Un ELISA indiretto viene utilizzato per rilevare gli anticorpi, mentre un altro tipo di ELISA indiretto - chiamato ELISA sandwich - può essere utilizzato per rilevare gli antigeni. Un protocollo ELISA sandwich richiede due anticorpi, chiamati anticorpi di cattura e rilevazione, per legarsi all'antigene desiderato. Viene aggiunta un'antiglobulina, che si lega all'anticorpo di rilevazione e viene aggiunto il substrato. L'ELISA indiretto segue un protocollo simile, ma utilizza un antigene di cattura piuttosto che un anticorpo di cattura per rilevare l'anticorpo desiderato.
L' ELISA competitivo viene spesso utilizzato per rilevare antigeni presenti a basse concentrazioni, poiché è un test molto sensibile. Contrariamente agli altri protocolli ELISA, ELISA competitivo utilizza un antigene enzimatico invece di un anticorpo e un metodo di quantificazione leggermente diverso. In esso, il campione contenente l'antigene da rilevare e l'antigene legato all'enzima vengono entrambi aggiunti a un anticorpo e i due antigeni competono per i siti di legame dell'anticorpo. Quando viene aggiunto il substrato, il cambiamento di colore è maggiore, con un rapporto più elevato tra antigeni legati agli enzimi legati e antigeni del campione legati. Ciò significa che un maggiore cambiamento di colore viene rilevato a concentrazioni più basse dell'antigene del campione, il che rende questo metodo così sensibile.