Co to jest testowanie pirogenów?

Testy pirogenne definiują proces stosowany przez producentów leków w celu ustalenia, czy toksyny bakteryjne są obecne w szczepionkach i lekach, które mogą powodować gorączkę, gdy są stosowane u ludzi. Określa, czy drobnoustroje lub ich metabolity są obecne w roztworach dożylnych podczas procesu produkcyjnego. Najczęstszą i najstarszą metodą badania pirogenów jest wstrzykiwanie królikom leków w celu ustalenia, czy wystąpi gorączka. W nowszym teście wykorzystuje się krew z kraba podkowy do badania na obecność toksyn.

Metoda testowania pirogenów królików pojawiła się w latach 40. XX wieku po tym, jak niektórzy pacjenci zachorowali na leki dożylne. Urządzenia do iniekcji podskórnych okazały się wówczas przydatne do podawania leków bezpośrednio do krwioobiegu u pacjentów, którzy nie tolerowali leków doustnych. Mimo że urządzenia do iniekcji podskórnych były sterylne, leki nie zawsze były bezpieczne.

Czasami pacjenci mieli gorączkę, dreszcze i bóle ciała, a niektórzy doznali szoku. Lekarze nie wiedzieli, dlaczego tak się dzieje, często nazywając ten stan gorączką od iniekcji, gorączką soli fizjologicznej lub gorączką wody destylowanej. Naukowcy odkryli później, że niektóre leki i szczepionki zostały zanieczyszczone w laboratoriach produkcyjnych endogennymi pirogenami, silnymi bakteriami odpornymi na sterylizację.

Ciało ludzkie walczy z ekspozycją na toksyny bakteryjne w środowisku przez skórę. Kiedy zanieczyszczone leki są wstrzykiwane do krwioobiegu, toksyny omijają normalne mechanizmy obronne. Białe krwinki zaczynają uwalniać inną formę pirogenu, który powoduje wysoką gorączkę, co może prowadzić do szoku i śmierci.

Testy pirogenne w laboratoriach narkotykowych obejmują urządzenia grzewcze stosowane do zapewnienia sterylizacji. Lek wstrzykuje się do żył usznych królików, aby sprawdzić, czy wystąpi gorączka. Temperatury w odbytnicy badanych zwierząt analizuje się po 30 minutach i ponownie jedną do trzech godzin później. Jeśli zwierzęta pozostają wolne od gorączki, roztwór jest wolny od toksyn.

Proces testowania pirogenów na zwierzętach zazwyczaj obejmuje wstrzyknięcie kilku królików na raz w ciągu 10 minut. Dawka dla każdego królika zależy od masy ciała, wieku i płci. Ta sama grupa królików może być badana wielokrotnie co kilka dni, aż rozwinie się tolerancja na leki.

Nowszą technikę testowania pirogenów nazywa się testem lizatu amebocytów limulusa (LAL). Krew z krabów podkowiastych zawiera wysoki poziom toksyn naturalnie występujących w życiu morskim. Naukowcy odkryli sposób wykorzystania krwi do badania toksyczności bakteryjnej w lekach i surowcach używanych do produkcji leków. Procedura testowania pirogenów LAL może być 100 razy bardziej czuła niż metody testowe na królikach. Wyroby medyczne wszczepiane ludziom przechodzą testy LAL wraz z lekami radioaktywnymi i znieczuleniem.