Co to jest test ELISA?
Test ELISA to proces testowy, który wykrywa substancje w celu identyfikacji niektórych chorób, alergii i nielegalnych narkotyków w organizmie. Wiadomo również, że jest stosowany do wykrywania ludzkiego wirusa niedoboru odporności (HIV). Niektóre z wykrywanych substancji to przeciwciała, hormony i białka. Główną zasadą leżącą u podstaw testu ELISA jest to, że reakcja chemiczna między próbką płynu pacjenta a określoną próbką laboratoryjną wskazuje na obecność określonej substancji związanej z określoną chorobą lub stanem medycznym. ELISA, jako akronim, oznacza „enzymatyczny test immunosorbcyjny”.
Wynalazek i opracowanie testu ELISA nastąpiło, ponieważ istniała potrzeba bezpieczniejszej metody testowania innej niż test radioimmunologiczny, który wykorzystuje radioaktywność do wywołania reakcji chemicznej. W latach 60. XX wieku dwie oddzielne grupy naukowców, którymi kierowali Stratis Avrameas i GB Pierce, odniosły sukces w partnerstwie niektórych przeciwciał z niektórymi enzymami i wywołaniu reakcji chemicznej z kombinacji. Mając tę wiedzę, dwóch naukowców z Uniwersytetu Sztokholmskiego, Peter Perlmann i Eva Engvall, wymyślili metodę ELISA, publikując swoje eksperymenty i system stojący za testem w 1971 roku. Od tego czasu test ELISA jest stosowany na całym świecie, chociaż test radioimmunologiczny jest wciąż dostępne ze względu na niższy koszt.
Istnieją dwa popularne typy testu ELISA: metoda bezpośrednia i pośrednia, przy czym ta ostatnia jest częściej stosowana. Pierwszym krokiem byłoby pobranie próbki od pacjenta, zwykle krwi lub moczu, przy czym oba mogą zostać poddane procesowi oddzielania w celu ekstrahowania klarownej surowicy zawierającej przeciwciała. Zestaw ELISA często zawiera płytkę zawierającą 96 mini-pojemników zwanych „studzienkami”, które będą pokryte antygenem, który może ewentualnie reagować z obecnym przeciwciałem. Antygen jest często uważany za obcą substancję, którą ciało atakuje przez wytwarzanie swoistych przeciwciał, więc jeśli pacjent nabył antygen z określonej choroby, jego surowica powinna zawierać przeciwciała, które odpowiadają temu antygenowi.
Następnie surowicę pacjenta wlewa się do studzienek, a następnie inkubuje, aby umożliwić przyleganie przeciwciał do powłoki białkowej. Po okresie inkubacji studzienki przepłukuje się, aby usunąć resztę surowicy i innych przeciwciał, które nie związały się z powłoką. Kolejny zestaw przeciwciał ekstrahowanych od zwierząt, zwykle szczurów, zostanie wlany do studzienek w celu wykrycia ludzkich przeciwciał, nastąpi kolejny okres inkubacji i przeciwciała zwierzęce zostaną ponownie wypłukane. Następnie zostanie dodany substrat enzymatyczny, aby reakcja była widoczna w kolorach. Zazwyczaj mocny odcień koloru wskazuje na wynik pozytywny, co oznacza, że pacjent ma przebadaną chorobę lub inne schorzenia.