リン酸化レベルはどのように決定されますか?
有機分子または物質のリン酸化レベルは、ウエスタンブロッティングと質量分析の2つの方法によって決定されます。リン酸化は、ほとんどの場合、リン酸のタンパク質への付着を指します。リン酸塩がタンパク質に付着すると、人体内のタンパク質酵素の自然なプロセスと機能が乱されます。 癌から糖尿病まで、幅広い疾患を治療するには、リン酸化レベルを決定することが重要です。
ウエスタンブロッティングは、特定のタンパク質セットのリン酸化レベルを決定するために使用される一般的な方法です。抗ホスホ - チロシンモノクローナル抗体などの抗体は、リン酸化の影響を受けるタンパク質のチロシン残基に簡単に結合するため、通常使用されます。ウエスタンブロッティングでは、タンパク質は最初にゲル電気泳動として知られる電荷法を使用してサイズによって分離されます。
タンパク質は、ホスファトに結合する特別な抗体で覆われた膜に移します。タンパク質上のES。タンパク質が転写されると、抗体はリン酸が付いたタンパク質に固執します。その後、リン酸化レベルは、膜のX線によって決定できます。影響を受けたタンパク質は、光の閃光を放出し、研究者がリン酸化レベルを測定しやすくなります。
質量分析は、物質のリン酸化レベルを測定するもう1つの方法です。このプロセスは、タンパク質分子をイオンに変換するため、追跡と測定が容易になります。サンプルは、サンプルを電子で浸水させる高出力イオン源によってイオン化されています。この作用は、サンプルをカチオンに変え、正に帯電したイオンに変わります。
質量分析計の質量分析器は、イオンの質量と電荷の強度によってイオンを分離します。これにより、研究者は質量対電荷比を発見することができます。これは、リン酸化レベルを発見する際に重要ですサンプルの。最後に、検出器は、データをチャート形式で表示できるように、イオンを順番に測定します。チャートは、X軸上のイオンの質量対電荷比と、Y軸上のイオンの相対強度を示しています。
リン酸化レベルは、基質リン酸化中にも測定できます。基質リン酸化は、解糖中に細胞間でエネルギー移動に重要な分子であるアデノシン三リン酸(ATP)を生成するプロセスです。このプロセスは、動物細胞と植物細胞の両方で発生します。
植物細胞では、ATP分子は太陽からのエネルギーを使用して作成されます。このエネルギーは、植物の光合成部位である植物の葉緑体にリン酸化を促します。リン酸化のレベルは、追加のATP分子を作成するために必要なリン酸の量と相関しています。