Como o nível de fosforilação é determinado?

O nível de fosforilação de moléculas ou substâncias orgânicas é determinado por dois métodos: Western blotting e espectrometria de massa. A fosforilação geralmente se refere à ligação de um fosfato à proteína. Quando os fosfatos se ligam aos protiens, os processos e funções naturais das enzimas proteínas dentro do corpo humano são perturbadas. Determinar o nível de fosforilação é crucial para o tratamento de uma ampla gama de doenças, do câncer a diabetes. Os anticorpos como os anticorpos monoclonais anti-fosfo-retosina são normalmente usados ​​porque se ligam facilmente aos resíduos de tirosina de uma proteína, que são afetados pela fosforilação. Em Western blotting, as proteínas são primeiro separadas por tamanho usando um método de carga elétrica conhecida como eletroforese em gel.ES em proteínas. Depois que as proteínas forem transferidas, os anticorpos grudam em qualquer proteínas com um fosfato ligado. O nível de fosforilação pode então ser determinado por um raio-x da membrana. Quaisquer proteínas afetadas emitirão um flash de luz, facilitando o pesquisador para medir os níveis de fosforilação.

A espectrometria de massa é outra maneira de medir o nível de fosforilação de uma substância. Esse processo converte as moléculas de proteína em íons, o que os torna mais fáceis de rastrear e medir. A amostra é ionizada por uma fonte de íons de alta potência que inunda a amostra com elétrons. Essa ação transforma a amostra em cátions, íons carregados positivamente.

O analisador de massa do espectrômetro de massa separa os íons por sua massa e intensidade de carga. Isso permite que o pesquisador descubra a proporção de massa / carga, que é fundamental para descobrir o nível de fosforilaçãoda amostra. Finalmente, o detector mede os íons em ordem para que os dados possam ser exibidos no formulário do gráfico. O gráfico mostra a taxa de massa / carga dos íons no eixo x e a intensidade relativa dos íons no eixo y.

Os níveis de fosforilação

também podem ser medidos durante a fosforilação do substrato. A fosforilação do substrato é um processo que cria trifosfato de adenosina (ATP), uma molécula crítica para a transferência de energia entre as células, durante a glicólise. Este processo ocorre nas células animais e nas células vegetais.

Nas células vegetais, as moléculas ATP são criadas usando energia do sol. Essa energia estimula a fosforilação nos cloroplastos da planta, o local da fotossíntese de plantas. O nível de fosforilação se correlaciona com a quantidade de fosfato necessária para criar moléculas ATP adicionais.