Jakie są etapy procedury ELISA?
Procedura ELISA rozpoczyna się w klinice od pobrania próbki krwi od pacjenta. Następnie wykonuje się szereg etapów przy użyciu zestawu testowego ELISA w laboratorium. Test wykryje obecność przeciwciał lub antygenów przeciwko chorobie, takiej jak HIV, we krwi. Kroki obejmują dodawanie różnych substancji i pranie, a wyniki są na ogół mierzone przez zmianę koloru.
Test immunoenzymatyczny (ELISA), określany również jako test immunoenzymatyczny (EIA), jest wykorzystywany jako test diagnostyczny. Najbardziej znany jest jako test diagnostyczny na obecność wirusa HIV. Płytka testowa zwykle składa się z 96 małych studzienek, w których specyficzny antygen jest unieruchomiony. Jeśli przeciwciało jest obecne w próbce surowicy, wiąże się z antygenem, umożliwiając wykrycie na różnych etapach procedury ELISA.
Pierwszym krokiem w procedurze ELISA jest pobranie próbki od pacjenta. Odbywa się to przez pielęgniarkę w sterylnych warunkach. Krew jest zwykle pobierana z żyły w ręce lub ręce. Opaska uciskowa jest umieszczona na ramieniu, aby puchnąć żyłę i ułatwić procedurę, a skóra jest czyszczona tam, gdzie zostanie wprowadzona igła. Niewielkie ukłucie może być odczuwalne, gdy igła wejdzie do środka, a krew zostanie zebrana w sterylnej probówce.
Po pobraniu próbki krwi jest ona przenoszona do laboratorium, w którym reszta procedury ELISA zostanie wykonana przez technika laboratoryjnego. Próbka krwi jest najpierw dodawana do studzienek płytki ELISA. Jeśli obecne jest specyficzne przeciwciało, wiąże się ono z antygenem. Płytkę następnie przemywa się, stosując bufor, w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał.
Następnie dodaje się drugie przeciwciało, zwykle pochodzenia zwierzęcego, do którego przyłączony jest enzym, który wiąże się z kompleksem przeciwciało-antygen. Płytkę ponownie przemywa się, aby usunąć nadmiar. Enzym reaguje na kolor, gdy substrat jest dodawany na końcu procedury ELISA. To pomiar stopnia zmiany koloru daje wynik.
Procedura ELISA musi być ściśle przestrzegana, aby uniknąć fałszywych wyników. Na większości płytek ELISA zawarta jest kontrola dodatnia i ujemna, aby zminimalizować takie fałszywe wyniki. Podczas testowania na obecność wirusa HIV po dodatnim wyniku zwykle następuje drugi test potwierdzający, często innego rodzaju, na przykład Western Blot.