Quelles sont les étapes de la procédure ELISA?
La procédure ELISA commence à la clinique, avec un échantillon de sang prélevé sur le patient. Un certain nombre d’étapes sont ensuite suivies à l’aide du kit de test ELISA en laboratoire. Le test détectera la présence dans le sang d'anticorps ou d'antigènes d'une maladie, telle que le VIH. Les étapes comprennent l’addition de diverses substances et le lavage, et les résultats sont généralement mesurés par un changement de couleur.
Le dosage immuno-enzymatique (ELISA), également appelé dosage immunoenzymatique (EIA), est utilisé comme test de diagnostic. Il est surtout connu comme test de diagnostic du VIH. La plaque d’essai consiste généralement en 96 petits puits dans lesquels un antigène spécifique est immobilisé. Si l'anticorps est présent dans l'échantillon de sérum, il se liera à l'antigène, ce qui permettra la détection via les différentes étapes de la procédure ELISA.
La première étape de la procédure ELISA consiste à obtenir un échantillon du patient. Ceci est fait par une infirmière, dans des conditions stériles. Le sang est généralement prélevé dans une veine du bras ou de la main. Un garrot est placé sur le bras pour gonfler la veine et faciliter la procédure et la peau est nettoyée à l'endroit où l'aiguille sera insérée. Une petite piqûre peut être ressentie lorsque l'aiguille entre et le sang sera recueilli dans un tube stérile.
Une fois l'échantillon de sang prélevé, il est transféré au laboratoire où le reste de la procédure ELISA sera effectué par un technicien de laboratoire. L'échantillon de sang est d'abord ajouté aux puits de la plaque ELISA. Si l'anticorps spécifique est présent, il se lie à l'antigène. La plaque est ensuite lavée, à l'aide d'un tampon, pour éliminer les anticorps non liés.
Un second anticorps, normalement d'origine animale, auquel une enzyme est attachée, est ensuite ajouté, ce qui se liera au complexe anticorps-antigène. La plaque est à nouveau lavée pour éliminer l'excès. L'enzyme réagit avec la couleur lorsqu'un substrat est ajouté à la fin de la procédure ELISA. C'est la mesure du degré de changement de couleur qui donne le résultat.
La procédure ELISA doit être suivie attentivement pour éviter les faux résultats. Dans la plupart des plaques ELISA, un contrôle positif et négatif est inclus afin de minimiser ces faux résultats. Lors du test VIH, un résultat positif sera généralement suivi d'un second test de confirmation, souvent d'un type différent, tel qu'un test Western Blot.