Vilka är stegen i ELISA-förfarandet?
ELISA-proceduren börjar i kliniken, med ett blodprov som tas från patienten. Ett antal steg följs sedan med ELISA-testpaketet i laboratoriet. Testet kommer att upptäcka närvaron av antikroppar eller antigener mot en sjukdom, såsom HIV, i blodet. Stegen inkluderar tillsats av olika ämnen och tvätt och resultat mäts vanligtvis genom en färgförändring.
Den enzymbundna immunosorbentanalysen (ELISA), som också benämns enzymimmunoanalysen (EIA), används som ett diagnostiskt test. Det är mest känt som ett diagnostiskt test för HIV. Testplattan består vanligtvis av 96 små brunnar i vilka ett specifikt antigen är immobiliserat. Om antikroppen finns i serumprovet binder den sig till antigenet, vilket möjliggör detektion via de olika stegen i ELISA-proceduren.
Det första steget i ELISA-proceduren är att erhålla ett prov från patienten. Detta görs av en sjuksköterska under sterila förhållanden. Blodet tas vanligtvis från en ven i armen eller handen. En turnett placeras på armen för att svälla venen och underlätta proceduren och huden rengörs där nålen kommer att sätts in. En liten prick kan kännas när nålen går in och blodet samlas i ett sterilt rör.
Efter att blodprovet har tagits överförs det till labbet där resten av ELISA-proceduren kommer att utföras av en labbtekniker. Blodprovet tillsättes först till ELISA-plattans brunnar. Om den specifika antikroppen är närvarande binder den till antigenet. Plattan tvättas sedan med användning av en buffert för att avlägsna obundna antikroppar.
En andra antikropp, normalt av animaliskt ursprung, som har ett enzym som är bundet till den tillsätts sedan, vilket kommer att binda till antikropp-antigenkomplexet. Plattan tvättas igen för att avlägsna överskottet. Enzymet är färgreaktivt när ett substrat tillsätts i slutet av ELISA-proceduren. Det är mätningen av graden av färgförändring som ger resultatet.
ELISA-förfarandet måste följas noggrant för att undvika falska resultat. I de flesta ELISA-plattor ingår en positiv och negativ kontroll för att minimera sådana falska resultat. När man testar för HIV, följs vanligtvis ett positivt resultat av ett andra, bekräftande test, ofta av en annan typ, till exempel en Western Blot.