Quali sono i passaggi della procedura ELISA?
La procedura ELISA inizia in clinica, con un campione di sangue prelevato dal paziente. Una serie di passaggi vengono quindi seguiti utilizzando il kit di test ELISA in laboratorio. Il test rileverà la presenza di anticorpi o antigeni a una malattia, come l'HIV, nel sangue. I passaggi includono l'aggiunta di varie sostanze e il lavaggio e i risultati sono generalmente misurati da un cambiamento di colore.
Il saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA), indicato anche come test immunoenzimatico (EIA), viene utilizzato come test diagnostico. È più noto come test diagnostico per l'HIV. La piastra di prova di solito consiste di 96 piccoli pozzetti in cui viene immobilizzato un antigene specifico. Se l'anticorpo è presente nel campione di siero, si legherà all'antigene, consentendo il rilevamento attraverso le varie fasi della procedura ELISA.
Il primo passo nella procedura ELISA è ottenere un campione dal paziente. Questo viene fatto da un'infermiera, in condizioni sterili. Il sangue viene solitamente prelevato da una vena del braccio o della mano. Un laccio emostatico è posizionato sul braccio per gonfiare la vena e rendere più semplice la procedura e la pelle viene pulita dove verrà inserito l'ago. Si può avvertire una piccola puntura mentre l'ago entra e il sangue verrà raccolto in un tubo sterile.
Dopo aver prelevato il campione di sangue, questo viene trasferito in laboratorio dove il resto della procedura ELISA verrà eseguita da un tecnico di laboratorio. Il campione di sangue viene prima aggiunto ai pozzetti della piastra ELISA. Se è presente l'anticorpo specifico, si lega all'antigene. La piastra viene quindi lavata, usando un tampone, per rimuovere gli anticorpi non legati.
Viene quindi aggiunto un secondo anticorpo, normalmente di origine animale, che ha un enzima ad esso attaccato, che si legherà al complesso anticorpo-antigene. La piastra viene nuovamente lavata, per rimuovere l'eccesso. L'enzima è reattivo per colore quando viene aggiunto un substrato al termine della procedura ELISA. È la misurazione del grado di cambiamento di colore che dà il risultato.
La procedura ELISA deve essere seguita attentamente per evitare risultati falsi. Nella maggior parte delle piastre ELISA è incluso un controllo positivo e negativo, per ridurre al minimo tali risultati falsi. Quando si esegue il test per l'HIV, un risultato positivo sarà di solito seguito da un secondo test di conferma, spesso di tipo diverso, come un Western Blot.