Quali sono i passaggi nella procedura ELISA?
La procedura ELISA inizia in clinica, con un campione di sangue prelevato dal paziente. Numerosi passaggi vengono quindi seguiti utilizzando il kit di test ELISA in laboratorio. Il test rileverà la presenza di anticorpi o antigeni a una malattia, come l'HIV, nel sangue. I passaggi includono l'aggiunta di varie sostanze e lavaggio e i risultati sono generalmente misurati da un cambiamento di colore.
Il test immunosorbente legato all'enzima (ELISA), che viene anche definito il test immuno-enzimatico (EIA), viene utilizzato come test diagnostico. È noto come un test diagnostico per l'HIV. La piastra di prova di solito è composta da 96 pozzi piccoli in cui viene immobilizzato un antigene specifico. Se l'anticorpo è presente nel campione sierico, si lega all'antigene, consentendo il rilevamento tramite le varie fasi della procedura ELISA.
Il primo passo nella procedura ELISA è ottenere un campione dal paziente. Questo viene fatto da un'infermiera, in condizioni sterili. Il sangue viene solitamente prelevato da una venanel braccio o nella mano. Un laccio emostatico viene posizionato sul braccio per gonfiare la vena e semplificare la procedura e la pelle viene pulita dove verrà inserito l'ago. Una piccola puntura può essere avvertita mentre l'ago entra e il sangue verrà raccolto in un tubo sterile.
Dopo aver prelevato il campione di sangue, viene trasferito al laboratorio in cui il resto della procedura ELISA verrà eseguito da un tecnico di laboratorio. Il campione di sangue viene prima aggiunto ai pozzi della piastra ELISA. Se è presente l'anticorpo specifico, si lega all'antigene. La piastra viene quindi lavata, usando un tampone, per rimuovere gli anticorpi non legati.
Viene quindi aggiunto un secondo anticorpo, normalmente di origine animale, che ha un enzima ad esso attaccato ad esso, che si lega al complesso anticorpo-antigene. La piastra viene nuovamente lavata, per rimuovere l'eccesso. L'enzima è reattivo del colore quando viene aggiunto un substrato alla fine della procedura ELISA. È thE Misurazione del grado di cambiamento di colore che dà il risultato.
La procedura ELISA deve essere seguita attentamente per evitare risultati falsi. Nella maggior parte delle piastre ELISA è incluso un controllo positivo e negativo, per ridurre al minimo tali risultati falsi. Durante il test per l'HIV, un risultato positivo verrà solitamente seguito da un secondo, conferma, test, spesso di un tipo diverso, come una macchia occidentale.