Quais são as etapas do procedimento ELISA?
O procedimento ELISA começa na clínica, com uma amostra de sangue sendo retirada do paciente. Várias etapas são seguidas usando o kit de teste ELISA em laboratório. O teste detectará a presença de anticorpos ou antígenos em uma doença, como o HIV, no sangue. As etapas incluem adição de várias substâncias e lavagem e resultados geralmente são medidos por uma mudança de cor. É mais conhecido como teste de diagnóstico para o HIV. A placa de teste geralmente consiste em 96 pequenos poços nos quais um antígeno específico é imobilizado. Se o anticorpo estiver presente na amostra sérica, ele se ligará ao antígeno, permitindo a detecção através das várias etapas do procedimento ELISA.
A primeira etapa no procedimento ELISA é obter uma amostra do paciente. Isso é feito por uma enfermeira, sob condições estéreis. O sangue é geralmente tirado de uma veiano braço ou mão. Um torniquete é colocado no braço para inchar a veia e facilitar o procedimento e a pele é limpa onde a agulha será inserida. Um pequeno idiota pode ser sentido quando a agulha entra e o sangue será coletado em um tubo estéril.
Depois que a amostra de sangue for coletada, ela é transferida para o laboratório, onde o restante do procedimento ELISA será realizado por um técnico de laboratório. A amostra de sangue é adicionada primeiro aos poços da placa ELISA. Se o anticorpo específico estiver presente, ele se liga ao antígeno. A placa é então lavada, usando um tampão, para remover anticorpos não ligados.
Um segundo anticorpo, normalmente de origem animal, que possui uma enzima que é ligada a ele, é então adicionada, que se ligará ao complexo anticorpo-antígeno. A placa é novamente lavada, para remover o excesso. A enzima é reativa a cores quando um substrato é adicionado no final do procedimento ELISA. É the medição do grau de mudança de cor que dá o resultado.
O procedimento ELISA precisa ser seguido com cuidado para evitar resultados falsos. Na maioria das placas ELISA, é incluído um controle positivo e negativo, para minimizar esses resultados falsos. Ao testar o HIV, um resultado positivo geralmente será seguido por um segundo teste confirmatório, muitas vezes de um tipo diferente, como um Western blot.