Quais são as etapas do procedimento ELISA?
O procedimento ELISA começa na clínica, com uma amostra de sangue sendo retirada do paciente. São seguidas várias etapas usando o kit de teste ELISA em laboratório. O teste detectará a presença de anticorpos ou antígenos em uma doença, como o HIV, no sangue. As etapas incluem adição de várias substâncias e lavagem e os resultados geralmente são medidos por uma mudança de cor.
O ensaio imunoabsorvente ligado a enzima (ELISA), também conhecido como imunoensaio enzimático (EIA), é utilizado como teste de diagnóstico. É mais conhecido como um teste de diagnóstico para o HIV. A placa de teste geralmente consiste em 96 pequenos poços nos quais um antígeno específico é imobilizado. Se o anticorpo estiver presente na amostra de soro, ele se ligará ao antígeno, permitindo a detecção através das várias etapas do procedimento ELISA.
O primeiro passo no procedimento ELISA é obter uma amostra do paciente. Isso é feito por uma enfermeira, em condições estéreis. O sangue é geralmente retirado de uma veia no braço ou na mão. Um torniquete é colocado no braço para inchar a veia e facilitar o procedimento, e a pele é limpa onde a agulha será inserida. Uma pequena picada pode ser sentida quando a agulha entra e o sangue é coletado em um tubo estéril.
Após a coleta da amostra de sangue, ela é transferida para o laboratório, onde o restante do procedimento ELISA será realizado por um técnico de laboratório. A amostra de sangue é adicionada primeiro aos poços da placa ELISA. Se o anticorpo específico estiver presente, ele se ligará ao antígeno. A placa é então lavada, usando um tampão, para remover anticorpos não ligados.
Um segundo anticorpo, normalmente de origem animal, que possui uma enzima que está ligada a ele, é então adicionado, que se ligará ao complexo anticorpo-antígeno. A placa é novamente lavada, para remover o excesso. A enzima é reativa à cor quando um substrato é adicionado no final do procedimento ELISA. É a medida do grau de mudança de cor que fornece o resultado.
O procedimento ELISA precisa ser seguido com cuidado para evitar resultados falsos. Na maioria das placas ELISA, é incluído um controle positivo e negativo, para minimizar esses resultados falsos. Ao testar o HIV, um resultado positivo geralmente será seguido por um segundo teste confirmatório, geralmente de um tipo diferente, como o Western Blot.