Jaké jsou kroky v postupu ELISA?
Postup ELISA začíná na klinice, přičemž vzorek krve je odebírán od pacienta. Poté se následuje několik kroků pomocí testovací sady ELISA v laboratoři. Test detekuje přítomnost protilátek nebo antigenů k onemocnění, jako je HIV, v krvi. Mezi kroky zahrnují přidání různých látek a praní a výsledků se obecně měří změnou barvy.
Enzymově spojený imunosorbentový test (ELISA), který se také označuje jako enzymový imunotest (EIA), se používá jako diagnostický test. Je nejznámější jako diagnostický test pro HIV. Zkušební deska obvykle sestává z 96 malých jamek, do nichž je imobilizován specifický antigen. Pokud je protilátka přítomna ve vzorku séra, váže se na antigen, což umožní detekci prostřednictvím různých kroků postupu ELISA.
Prvním krokem v postupu ELISA je získat vzorek od pacienta. To se provádí zdravotní sestrou za sterilních podmínek. Krev je obvykle odebírána z žílyv paži nebo ruce. Na paži je umístěn turniket, aby se otočil žílou a usnadnil postup a pokožka se vyčistí tam, kde bude jehla vložena. Když jehla dovnitř, může být pociťována malá píchnutí a krev bude odebrána ve sterilní trubici.
Po odevzdání vzorku krve se přenese do laboratoře, kde bude zbytek postupu ELISA prováděn laboratorním technikem. Vzorek krve je nejprve přidán do jamek desky ELISA. Pokud je přítomna specifická protilátka, váže se na antigen. Destička se poté promyje pomocí pufru k odstranění nevázaných protilátek.
Poté se přidá druhá protilátka, obvykle původu zvířat, který má enzym, který je k němu připojen, který se váže na komplex protilátky-antigen. Deska je opět promyta, aby se odstranil přebytek. Enzym je barevně reaktivní, když je na konci postupu ELISA přidán substrát. Je to thE měření stupně změny barev, která dává výsledek.
Postup ELISA je třeba pečlivě dodržovat, aby se zabránilo nepravdivým výsledkům. Ve většině desek ELISA je zahrnuta pozitivní a negativní kontrola, aby se tyto falešné výsledky minimalizovaly. Při testování na HIV bude obvykle následovat pozitivní výsledek druhý, potvrzující test, často jiného typu, jako je Western blot.