Was sind die Schritte im ELISA-Verfahren?
Das ELISA-Verfahren beginnt in der Klinik, wobei dem Patienten eine Blutprobe entnommen wird. Anschließend werden mit dem ELISA-Testkit im Labor mehrere Schritte durchgeführt. Der Test erkennt das Vorhandensein von Antikörpern oder Antigenen gegen eine Krankheit wie HIV im Blut. Die Schritte umfassen die Zugabe verschiedener Substanzen und das Waschen und die Ergebnisse werden im Allgemeinen durch eine Farbänderung gemessen.
Der Enzymimmunoassay (ELISA), der auch als Enzymimmunoassay (EIA) bezeichnet wird, wird als diagnostischer Test verwendet. Am bekanntesten ist es als diagnostischer Test für HIV. Die Testplatte besteht normalerweise aus 96 kleinen Vertiefungen, in denen ein bestimmtes Antigen immobilisiert ist. Wenn der Antikörper in der Serumprobe vorhanden ist, bindet er an das Antigen und ermöglicht den Nachweis über die verschiedenen Schritte des ELISA-Verfahrens.
Der erste Schritt im ELISA-Verfahren ist die Entnahme einer Probe vom Patienten. Dies wird von einer Krankenschwester unter sterilen Bedingungen durchgeführt. Das Blut wird normalerweise aus einer Arm- oder Handvene entnommen. Ein Tourniquet wird auf den Arm gelegt, um die Vene anzuschwellen und den Eingriff zu erleichtern. Die Haut wird dort gereinigt, wo die Nadel eingeführt wird. Beim Einstechen der Nadel kann ein kleiner Stich zu spüren sein, und das Blut wird in einem sterilen Röhrchen gesammelt.
Nachdem die Blutprobe entnommen wurde, wird sie in das Labor transferiert, wo der Rest des ELISA-Verfahrens von einem Labortechniker durchgeführt wird. Die Blutprobe wird zuerst in die Vertiefungen der ELISA-Platte gegeben. Wenn der spezifische Antikörper vorhanden ist, bindet er an das Antigen. Die Platte wird dann unter Verwendung eines Puffers gewaschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen.
Anschließend wird ein zweiter Antikörper, normalerweise tierischen Ursprungs, mit einem daran gebundenen Enzym zugesetzt, der an den Antikörper-Antigen-Komplex bindet. Die Platte wird erneut gewaschen, um überschüssiges Material zu entfernen. Das Enzym ist farbreaktiv, wenn am Ende des ELISA-Verfahrens ein Substrat zugesetzt wird. Es ist die Messung des Grades der Farbänderung, die das Ergebnis ergibt.
Das ELISA-Verfahren muss sorgfältig befolgt werden, um falsche Ergebnisse zu vermeiden. In den meisten ELISA-Platten ist eine positive und negative Kontrolle enthalten, um solche falschen Ergebnisse zu minimieren. Wenn auf HIV getestet wird, folgt auf ein positives Ergebnis normalerweise ein zweiter Bestätigungstest, häufig eines anderen Typs, wie z. B. ein Western Blot.