O que é sequenciamento bissulfito?

O sequenciamento de bissulfito é um método no qual diferentes regiões de DNA são analisadas usando metilação. A metilação é o processo de adição de uma molécula específica, chamada grupo metil, a um nucleotídeo, neste caso geralmente uma citosina. Os nucleotídeos inativos são frequentemente metilados; portanto, esse método pode ser usado para uma variedade de propósitos, desde a determinação de regiões ativas de um genoma até a identificação de regiões ricas em genes. No seqüenciamento de bissulfito, as citosinas metiladas não são afetadas pelo processo de sequenciamento, enquanto as citosinas não metiladas são convertidas em uracil, um nucleotídico geralmente não encontrado no material genético, o desoxirribonucleico é o que é um método de alterações específicas (DNA). O bissulfito de sódio converte a citosina em uracil, mas a conversão ocorre em um ambiente em que a citosina metilada não sofrerá essa mudança. Quando o sequenciamento de bissulfito está completo, a origemO DNA AL foi convertido em uma molécula significativamente diferente. As citosinas serão muito esgotadas ou potencialmente ausentes. Se uma citosina ainda for encontrada nesta molécula convertida, representa uma citosina naturalmente metilada no genoma em consideração.

Como todos os protocolos experimentais, o sequenciamento de bissulfito tem desvantagens. Sua desvantagem mais significativa é que ele requer uma concentração de sal muito alta para funcionar corretamente. O sal incentiva o recozimento do DNA de fita simples em sua hélice dupla mais natural, e o bissulfito de sódio nem sempre pode atingir citosinas quando fazem parte do DNA de fita dupla. Se a concentração de sal for muito alta, várias citosinas podem não ser convertidas em uracil, resultando em falsa identificação de citosinas metiladas dentro de um genoma. Agentes desnaturadores podem ser necessários para minimizar o número de identificações falsas positivas.

AMO grandeOs dados genômicos não são necessários para o seqüenciamento de bissulfito, portanto o método possui um aplicativo útil analisando amostras clínicas. A fonte original do ácido nucleico não importa, mas a fonte deve ser DNA. Em teoria, o ácido ribonucleico (RNA) pode ser sequenciado usando esse método, uma vez que a maioria dos RNA é de fita única e não seria tão suscetível a falsos positivos devido a nucleotídeos bloqueados. Quando colocado em prática, no entanto, o sequenciamento de bissulfito não é útil para o RNA, porque o RNA naturalmente possui uracil. Sem algum tipo de marcação externa ou adição ao protocolo, as citosinas convertidas seriam indistinguíveis do uracil natural.

Ao realizar qualquer tipo de metodologia de sequenciamento, a precisão e a precisão são essenciais. Métodos sensíveis como o sequenciamento de bissulfito oferecem um meio confiável de análise de sequência, que por sua vez permite a análise de genes e a identificação de alvos para medicamentos e terapias. Embora este método não possa ser usado em pessoas vivas, ainda pode serde grande ajuda apenas com as menores amostras de tecido para trabalhar.